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奧林巴斯顯微鏡的共聚焦顯微鏡的詞匯

2020-08-18 10:09:34 奧林巴斯顯微鏡
  • 吸光度(光密度)-光的通過(guò)化學(xué)或生物物質(zhì)所吸收的量測(cè)得的分光光度計(jì)或類似的裝置。吸光度的單位是等同于倒數(shù)透射率(透射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度之比)的對(duì)數(shù)。吸收帶通常涵蓋范圍廣泛(許多幾十或幾百),波長(zhǎng)和通常繪制成強(qiáng),傳輸或光密度與波長(zhǎng)。

  • 聲光可調(diào)諧濾波器(AOTF)- 其利用聲波一種過(guò)濾裝置,用于調(diào)制波長(zhǎng)或光由激光或非相干照射源(主要是電弧放電燈)發(fā)出的光的強(qiáng)度。該濾波器由一個(gè)專門的晶體,諸如碲氧化物或石英,聲學(xué)換能器和吸收器之間夾以誘導(dǎo)站在聲波具有高和低折射率的交替域。如任一偏振的或非偏振的光通過(guò)濾波器,晶體充當(dāng)衍射光柵偏轉(zhuǎn)入射光束。特定波長(zhǎng)的光被通過(guò)改變輸送到晶體,從而改變衍射光柵的周期的聲波的頻率選擇。

  • 吖啶橙-氮雜環(huán)生色含有吖核,其通過(guò)連續(xù)的堿基對(duì)之間的嵌入結(jié)合DNA和RNA,以產(chǎn)生一個(gè)強(qiáng)有力的,但非常寬的發(fā)射頻帶中的綠色到紅色的波長(zhǎng)區(qū)域。吖啶橙通過(guò)藍(lán)綠色激光(488納米)或通過(guò)紫外線,紫色,以及耦合到電弧放電燈(汞或氙)藍(lán)色干涉濾光片激發(fā)。熒光團(tuán)是一個(gè)極好的候選,用于顯示許多蜂窩結(jié)構(gòu),但是因?yàn)閷挼?a title='發(fā)射光' target='_blank' class='seolabel'>發(fā)射光譜的不用于多探針染色是有用的。

  • Alexa Fluor染料 - 合成熒光綴合物染料,由Molecular Probes公司的商標(biāo),是用于標(biāo)記抗體,核酸是有用的,如用于蛋白質(zhì)一般探針,細(xì)胞骨架分子,脂質(zhì),和一般的神經(jīng)科學(xué)。為的Alexa Fluor染料的激發(fā)和發(fā)射光譜跨越紫外區(qū)域和整個(gè)可見光光譜的較高波長(zhǎng)的部分,甚至延伸到近紅外頻率。在一般情況下,將Alexa Fluor染料是指出他們的高穩(wěn)定性和抗光漂白。

  • 衰減(阻塞)級(jí)別-前它的光學(xué)系統(tǒng)中被檢測(cè)到,如在熒光顯微鏡減少的可見光或紫外線光信號(hào)或抑制。衰減的程度,通常表示在特定波長(zhǎng)或波長(zhǎng)范圍內(nèi)的相對(duì)強(qiáng)度或*光密度的函數(shù)。衰減,也稱為調(diào)制或阻斷光的強(qiáng)度,可以完成與中性密度濾光片或一個(gè)聲 - 光可調(diào)濾光器(AOFT)的共焦顯微鏡。

  • 自體熒光(初級(jí)熒光)背景熒光,由于內(nèi)源性代謝物和有機(jī)或無(wú)機(jī)存在于生物樣本和其它材料的熒光化合物的生成。在一些情況下,自發(fā)熒光是足夠高的強(qiáng)度,以與來(lái)自熒光標(biāo)記的分子的預(yù)期信號(hào)相混淆。自身熒光在生物細(xì)胞和組織的常見來(lái)源是黃素,黃素蛋白和核苷酸(FAD和FMN),B族維生素,還原吡啶核苷酸(NADH和NADPH),脂肪酸,細(xì)胞色素,卟啉,lipofuchsin顏料,血清素,和兒茶酚胺。自身熒光在植物細(xì)胞中從葉綠素(紅色熒光)和木質(zhì)素(綠色熒光)派生主要。在一般情況下,自體熒光發(fā)射是*大的,當(dāng)活細(xì)胞進(jìn)行檢查以藍(lán)色和紫外光的激發(fā)波長(zhǎng)。

  • 自動(dòng)熒光圖像分析(中)-再加計(jì)算機(jī)化顯微系統(tǒng)(反射光熒光顯微鏡,低光級(jí)相機(jī)和計(jì)算機(jī))的熒光探針的應(yīng)用,以使染色標(biāo)本提供可靠和準(zhǔn)確的檢測(cè)幾乎所有細(xì)胞的高速自動(dòng)篩選。在臨床標(biāo)本的疾病標(biāo)志物可以使用這種技術(shù),通過(guò)使用附著到抗體或核酸特異性和敏感性熒光染料進(jìn)行監(jiān)測(cè)。物鏡熒光團(tuán)的有選擇性的激發(fā)產(chǎn)生具有高信號(hào)對(duì)噪聲的比率進(jìn)一步增加檢測(cè)的靈敏度的圖像。

  • 平均傳輸-在過(guò)濾器的命名,平均傳輸是指在某一特定區(qū)域的透射光的平均電平(有用發(fā)送頻帶),而不是在整個(gè)光譜。在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的帶通濾波器,所述平均傳輸區(qū)域橫跨在發(fā)送頻帶的半*大值(FWHM)的整個(gè)寬度。在長(zhǎng)通和短通濾波器,該術(shù)語(yǔ)表示過(guò)去的切口上,并切斷波長(zhǎng)發(fā)射的波長(zhǎng)區(qū)域,分別。

  • 背景-可檢測(cè)的光(噪聲)不是從一個(gè)熒光探針的發(fā)射信號(hào)的一部分。的背景噪聲源包括激發(fā)和發(fā)射濾波器之間的串?dāng)_,來(lái)自于激發(fā)和發(fā)射濾光片針孔工件光泄漏,熒光染料的封固劑,非特異性熒光染色,電子噪聲在數(shù)字照相機(jī)系統(tǒng)的出血,和自體熒光。理想情況下,在熒光顯微鏡背景是黑色*大化的標(biāo)本對(duì)比度。

  • 帶通濾波器- 一個(gè)過(guò)濾器,傳遞一個(gè)定義,而衰減具有光波長(zhǎng)都比通帶較短和較長(zhǎng)的波長(zhǎng)區(qū)域(或帶)。所發(fā)送的頻帶的中心波長(zhǎng)被稱為中心波長(zhǎng)(通常簡(jiǎn)稱CWL)。有效帶寬是由全寬度半*大值(FWHM)的傳輸,可以將可選地稱為半帶寬(HBW)表示。帶通濾波器通常用作激發(fā),和較少,如在熒光顯微鏡屏障過(guò)濾器。

  • 屏障(排放)濾波器-光學(xué)濾波器通常設(shè)計(jì)成一個(gè)長(zhǎng)通或具有良好定義的帶通區(qū)域,其發(fā)送從檢體,同時(shí)阻止殘余激發(fā)光收集物鏡熒光發(fā)射波長(zhǎng)。屏障過(guò)濾器通常制造用著色玻璃或具有多重干涉腔和匹配在套與激發(fā)濾光片和二色反射鏡,以產(chǎn)生*佳的結(jié)果。

  • 分光鏡用于分離光的入射波束成隨后被投射在不同方向的兩個(gè)或多個(gè)部件的一個(gè)常見的光學(xué)設(shè)備。分束鏡是在一個(gè)不同的配置,以滿足特定的要求提供。三目觀察筒組件的光學(xué)顯微鏡利用棱鏡分光器同時(shí)直接成像光束的目鏡和一個(gè)傳統(tǒng)或數(shù)碼相機(jī)系統(tǒng)。偏振分束器組成的結(jié)晶雙折射材料,以產(chǎn)生線性偏振光。在熒光顯微鏡,兩色(通常被稱為分色)鏡作為分光鏡來(lái)反映激發(fā)波長(zhǎng)回源,同時(shí)發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的二次熒光發(fā)射的目鏡或探測(cè)器。

  • 生物發(fā)光 生化氧化過(guò)程導(dǎo)致能量的釋放作為發(fā)射的光。螢火蟲發(fā)光,這需要酶螢光素酶催化底物螢光素和分子氧(以三磷酸腺苷的存在)之間的反應(yīng),是生物發(fā)光的一個(gè)常用例子。這種現(xiàn)象發(fā)生在多種海洋生物和昆蟲。

  • 放氣通過(guò)(交叉)-流血通或者不想要的波長(zhǎng)通過(guò)旨在阻止它們的光學(xué)濾光器發(fā)生交叉。該效應(yīng)通常發(fā)生在一個(gè)過(guò)濾器的設(shè)計(jì)不允許波長(zhǎng)排除在帶通區(qū)域的完整消干涉。滲出通過(guò)也是一個(gè)問(wèn)題,當(dāng)入射光的角度是相對(duì)于所述過(guò)濾器表面時(shí),或當(dāng)熒光染料的激發(fā)和發(fā)射光譜重疊高度傾斜。

  • 籠熒光基團(tuán) - 一只籠中的熒光團(tuán)通常是共價(jià)連接至所述籠蔽部分(通常是有機(jī)結(jié)構(gòu)),但是可以通過(guò)光脈沖進(jìn)行光解釋放(解籠鎖)。典型的熒光染料使用的是硝基芐基衍生物,其鎖定熒光物質(zhì)成非熒光互變異構(gòu)形式籠。各種籠分子已合成和實(shí)驗(yàn)使用。

  • 生色團(tuán) - 天然存在的或合成的顏料具有特征的光吸收,通常包含交替的單鍵和雙鍵的或環(huán)狀的芳族或雜環(huán)綴合的程度高的組合。在光學(xué)顯微鏡,發(fā)色團(tuán)經(jīng)常提及古典染料,如曙紅,藏紅或蘇木,用于染色的組織進(jìn)行明觀察。因?yàn)樗鼈儽憩F(xiàn)出在紫外線,可見光和/或近紅外區(qū)域強(qiáng)的吸收光譜的熒光探針也被歸類為發(fā)色團(tuán)。

  • 相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)顯微鏡 相干反斯托克斯拉曼散射顯微鏡的主要好處是,它使生物分子的調(diào)查不添加合成的熒光標(biāo)記的或內(nèi)源耦合到熒光蛋白。相反,該技術(shù)是基于靶分子的振動(dòng)特性,并且不需要的物種是由紫外光或可見光電子激發(fā)。在實(shí)踐中,快速(皮秒或更低)的激光脈沖在近紅外區(qū)有兩個(gè)來(lái)源都聚焦到用顯微鏡物鏡和光柵掃描在橫向和軸向平面上的檢體。脈沖由選定分子的振動(dòng)模式分離的頻率,并產(chǎn)生一個(gè)新的光束,其具有的波長(zhǎng)比入射光束更短,在物鏡的焦點(diǎn)。二次波束生成對(duì)象物質(zhì)的濃度分布,使檢體的三維圖像的結(jié)構(gòu)。

  • 相干光 - 光束由所述個(gè)體波振動(dòng)同相位的定義,但不一定在同一平面上。為了維持長(zhǎng)距離相同相位關(guān)系,相干光波必須是單色(具有相同的波長(zhǎng)下)。例如,激光是高度相干的,幾乎單色的,且通常為線性偏振。

  • 冷鏡 該工作在很寬的溫度范圍內(nèi)的專門二色性干涉過(guò)濾器,以反映整個(gè)可見光光譜的同時(shí)非常有效地透射紅外線波長(zhǎng)。類似熱鏡,冷反射鏡可以被設(shè)計(jì)為一個(gè)入射角介于零到45度,并用多層介質(zhì)膜的構(gòu)造,并以類似于干涉濾光片的方式。冷反射鏡可以用作二色性分束器與激光系統(tǒng),以反射可見光的波長(zhǎng)而透射紅外線。

  • 聚光透鏡-在廣角熒光顯微鏡,所述集光透鏡被定位電弧放電燈和垂直照明器之間?,F(xiàn)代燈室都配備有調(diào)節(jié)旋鈕,使集光透鏡的平移聚焦燈放電等離子體球。集電極透鏡收集的光通過(guò)廣域和定向的光以用于傳輸?shù)綑z體的垂直照明的后部。當(dāng)一個(gè)熒光顯微鏡被配置為適當(dāng)?shù)目评照彰鳎姌O透鏡用于聚焦電弧等離子體的放大的實(shí)像在聚光鏡(物鏡)的前部孔。

  • 有色玻璃濾光片- 玻璃濾光片包含嵌入式膠體或設(shè)計(jì)吸收特定波長(zhǎng)的自由,而其他傳輸溶解的金屬。在熒光顯微鏡中,有色玻璃濾光片曾經(jīng)廣泛地用于激發(fā)和屏障過(guò)濾器集和的紫外和紅外光作為有效阻斷。

  • 共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)- 光學(xué)顯微鏡的一個(gè)流行的模式,其中聚焦的激光束橫向掃描沿柵格圖案的試樣的x和y軸。所發(fā)射的熒光(反射光信號(hào))由一個(gè)光電倍增管檢測(cè)并在一個(gè)計(jì)算機(jī)監(jiān)視器上顯示的像素。像素顯示維度是由電子設(shè)備的采樣率和光柵的尺寸來(lái)確定。個(gè)從焦平面發(fā)射遠(yuǎn)信號(hào)光子被設(shè)在一個(gè)平面上的共焦與試樣針孔光圈擋。這種技術(shù)使得能夠光學(xué)地沿著z軸切片標(biāo)本。

    復(fù)合視圖(投影視圖)- 通過(guò)添加沿一個(gè)共聚焦或多光子熒光顯微鏡的z軸一起獲取多個(gè)光纖段中創(chuàng)建一個(gè)看似三維圖像(該技術(shù)也可以被用微分干涉對(duì)比光學(xué)使用)。在常規(guī)的寬視場(chǎng)熒光顯微鏡,立體標(biāo)本圖像往往由于排放產(chǎn)生的離即時(shí)焦平面模糊。當(dāng)用共聚焦顯微鏡收集相同的圖像往往非常尖銳。

  • 串?dāng)_ -  在標(biāo)準(zhǔn)濾波器術(shù)語(yǔ)的一個(gè)術(shù)語(yǔ),它描述了*小衰減(阻塞)級(jí)以上的兩個(gè)濾波器放置在一起以串聯(lián)(背到后端)在指定范圍內(nèi)。過(guò)濾器的串?dāng)_程度應(yīng)為熒光組配套的激發(fā)和障礙(排放)過(guò)濾器時(shí),應(yīng)認(rèn)真考慮。二色鏡通常包括在熒光濾光片組合串?dāng)_評(píng)估。減少或消除串?dāng)_有助于提供未從乘法染色標(biāo)本,其光譜落在很大程度上出濾波器集合帶寬的熒光團(tuán)并發(fā)熒光發(fā)射的圖像。

  • 菁染料(花青染料)- 含有一個(gè)集中的雜環(huán)惡唑基部分,花青染料是熒光探針首先由Amersham公司銷售的,這是眾所周知的高耐光性,良好的水溶性,并且相對(duì)高效量子產(chǎn)率的程度?;ㄇ嗳玖险业皆S多應(yīng)用如用于蛋白質(zhì)亞細(xì)胞組分的熒光標(biāo)記物,核酸,和。所述熒光染料可以是微調(diào)在分子水平上,以產(chǎn)生具有寬的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)光譜的衍生物,并且可以是在結(jié)構(gòu)上改變,以控制溶解性,非特異性相互作用(降低背景噪聲),和物鏡反應(yīng)性。

  • 反卷積熒光顯微鏡解卷積分析是適用的算法來(lái)沿光(z)的獲得的圖像的一個(gè)貫通焦點(diǎn)堆棧軸線以增強(qiáng)特異性針對(duì)在圖像堆棧的給定圖像平面或多個(gè)焦平面光子信號(hào)的技術(shù)。顯微鏡必須配備安裝于焦點(diǎn)齒輪組,以保證圖像采集在試樣焦平面之間精確限定的時(shí)間間隔的步進(jìn)電動(dòng)機(jī)。在典型的應(yīng)用中,反卷積分析被用于去模糊,并使用熒光激發(fā)和發(fā)射(盡管該技術(shù)對(duì)其它照明模式也是有用的)從感興趣的特定焦平面除去失焦光。*復(fù)雜的應(yīng)用中應(yīng)用去卷積分析,以整個(gè)圖像的堆棧,以產(chǎn)生投影視圖或三維模型。

  • descanning- 允許光通過(guò)在共聚焦顯微鏡檢體發(fā)射的光的過(guò)程中由物鏡收集并折回其路徑返回通過(guò)掃描鏡到二色鏡。當(dāng)descanning機(jī)構(gòu)被正確地對(duì)準(zhǔn),在探測(cè)器針孔的熒光圖像斑點(diǎn)保持穩(wěn)定并且不會(huì)搖晃。

  • 雙色分光鏡(分光鏡)干涉濾光器/鏡組合在熒光顯微鏡濾波器常用設(shè)置,以產(chǎn)生發(fā)射和反射的波長(zhǎng)之間的清晰的過(guò)渡。當(dāng)在相對(duì)于入射照明和發(fā)射光束以45度角傾斜時(shí),二色鏡反射通過(guò)一個(gè)90度角的短激發(fā)波長(zhǎng)上的檢體,并直通到目鏡和檢測(cè)器系統(tǒng)發(fā)送較長(zhǎng)發(fā)射的熒光的波長(zhǎng)。制成與干擾薄膜用于熒光顯微鏡二色反射鏡能夠反射90%或更多的激發(fā)光的同時(shí)發(fā)射約90%的發(fā)射帶的。該二色鏡通常是包含熒光光濾波器塊內(nèi)三濾(激發(fā),阻隔,兩色鏡)的核心要素。

  • 停留時(shí)間 - 在共聚焦顯微鏡的一個(gè)術(shù)語(yǔ),指的的是,掃描的激光束被允許保持在對(duì)應(yīng)于在圖像中的單個(gè)像素空間中的單位時(shí)間的長(zhǎng)度。通常,停留時(shí)間的范圍為0.1到1微秒或更長(zhǎng)的時(shí)間,但設(shè)置的停留很長(zhǎng)的時(shí)間增加了漂白的速度并降低活細(xì)胞的生存能力。

  • 電子狀態(tài) 在原子或分子,而這又決定了負(fù)電荷(電子)在分子內(nèi)和分子幾何分布的電子的整體結(jié)構(gòu)。任何給定的分子可以在多種電子態(tài)(地面或多個(gè)興奮),這取決于總的電子能量和電子的自旋對(duì)稱的軌道中的一個(gè)存在。在室溫下,大多數(shù)的分子中存在的電子狀態(tài)用*少的能量(基態(tài))。當(dāng)分子吸收光子,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)(激發(fā)態(tài))。

  • 發(fā)射光譜 后它由原子或分子(熒光色素)發(fā)射的波長(zhǎng)的頻帶(頻譜)已被激發(fā)的光或能量從另一個(gè)輻射源的光子。后的熒光已發(fā)射的光子,則它返回到地面層次的能量狀態(tài),并準(zhǔn)備用于激發(fā)和發(fā)射的另一周期。典型地,熒光發(fā)射光譜,其被繪制為相對(duì)強(qiáng)度作為波長(zhǎng)的函數(shù),被定位在比刺激激發(fā)光譜的較長(zhǎng)波長(zhǎng)的區(qū)域(實(shí)際上,發(fā)射的平均波長(zhǎng)長(zhǎng)于激發(fā)的平均波長(zhǎng)) 。此外,該熒光發(fā)射光譜的波長(zhǎng)范圍和強(qiáng)度分布通常是獨(dú)立的激發(fā)波長(zhǎng)的光。

  • 落射照明(反射光)- 照明熒光和反射光顯微術(shù)的模式。在一個(gè)反射或外延結(jié)構(gòu)中,照明源(通常稱為垂直照明燈)被放置在檢體為物鏡,它作為兩個(gè)聚光和成像透鏡系統(tǒng)的雙重作用的同一側(cè)。在熒光顯微鏡中包含的戰(zhàn)略定位在光路內(nèi),以反映從在試樣的方向上的燈的激發(fā)光并發(fā)射發(fā)射的熒光的目鏡或探測(cè)器系統(tǒng)中的二色鏡。

  • 激發(fā)(激發(fā)器)過(guò)濾器 - 從匹配濾波器組(或?yàn)V波器立方體)在熒光顯微鏡的光學(xué)列車的*個(gè)元素。激發(fā)濾光器,連同其在該組貿(mào)易伙伴,通常是裝在垂直(EPI)照明器和過(guò)濾器選擇的區(qū)域從寬帶光源(如汞或氙弧光放電燈),以產(chǎn)生波長(zhǎng)的激發(fā)頻帶為熒光顯微鏡。激發(fā)濾光片經(jīng)常產(chǎn)生如使用干涉濾光器技術(shù)的選擇性帶通濾波器,但著色(染色)玻璃它們也可以構(gòu)成。

  • 激發(fā)光譜 波長(zhǎng)的光譜,通常范圍從紫外和可見光光譜,其能夠激發(fā)熒光染料(原子或分子),以表現(xiàn)出熒光。通過(guò)掃描,通過(guò)熒光染料或熒光團(tuán)的吸收光譜中產(chǎn)生的激發(fā)光譜,同時(shí)監(jiān)測(cè)在一個(gè)單一的(峰值)波長(zhǎng)的發(fā)射。在類似的吸收光譜的方式,激發(fā)是由于受激分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)弛豫(內(nèi)部轉(zhuǎn)換)變寬。吸收和激發(fā)光譜是不同的,但往往重疊,有時(shí),他們幾乎無(wú)法區(qū)分的程度。

  • 濾波器斜率 - 光學(xué)濾波器的斜率是阻斷和傳輸之間的過(guò)渡區(qū)域的濾波器配置的指示。一般來(lái)說(shuō),濾波器的斜率是由波長(zhǎng)的濾波器具有一個(gè)指定的塊級(jí)別和在這個(gè)區(qū)域的變化率的定義。兩濾波器或截止波長(zhǎng)有相同的削減,但仍有顯著不同的阻塞水平和斜坡。非常尖銳的斜坡截止或切割區(qū)域發(fā)射波長(zhǎng)窄帶寬,而淺層邊坡具有較大的帶寬。

  • 熒光 通過(guò)該過(guò)程的合適的原子或分子,這是瞬時(shí)由外部輻射的吸收在適當(dāng)?shù)哪芰克剑ㄍǔJ亲贤夤饣蚩梢姽猓┘ぐl(fā)時(shí),釋放所吸收的能量作為具有波長(zhǎng)長(zhǎng)于吸收的能量的光子。在熒光,電子提升到的激發(fā)軌道單重態(tài)配對(duì)(或相反的自旋)相對(duì)于在基態(tài)軌道的第二電子。其結(jié)果,返回電子的基態(tài)是自旋允許并迅速與光子的伴隨發(fā)射發(fā)生。熒光激發(fā)和發(fā)射過(guò)程通常發(fā)生在小于納秒。

    熒光各向異性 - 一個(gè)術(shù)語(yǔ),指由于與入射的光子的電矢量的吸收偶極矩的瞬時(shí)對(duì)準(zhǔn)熒光基團(tuán)的選擇性激發(fā)。類似的激發(fā),以激發(fā)熒光團(tuán)的熒光發(fā)射發(fā)生在一個(gè)平面的取向平行于發(fā)射偶極矩。過(guò)渡(偶極)激發(fā)和發(fā)射的時(shí)刻有一個(gè)明確的方向與染料分子的分子軸,并通過(guò)一個(gè)角度彼此分開。激發(fā)態(tài)的壽命期間的熒光去極化的旋轉(zhuǎn),將其排放的激發(fā)向量,產(chǎn)生一種機(jī)制來(lái)測(cè)量剛度(粘度)含熒光基團(tuán)的環(huán)境。熒光各向異性定義為平行于偏振的令人興奮的光的電矢量垂直于矢量強(qiáng)度的發(fā)射強(qiáng)度之間的差的比率,除以總強(qiáng)度。

  • 熒光相關(guān)光譜(FCS)- 主要用激光掃描共聚焦或多光子顯微鏡,熒光相關(guān)光譜是一個(gè)設(shè)計(jì)為確定在只包含一個(gè)卷或幾個(gè)分子的分子動(dòng)力學(xué),關(guān)于化學(xué)反應(yīng)速率,擴(kuò)散系數(shù),分子量,流速,和聚集產(chǎn)生的信息的技術(shù)。在FCS,小體積(大約1飛升)照射聚焦的激光束來(lái)記錄從數(shù)字或占用容積作為時(shí)間的函數(shù)的分子的量子產(chǎn)率產(chǎn)生的自發(fā)熒光強(qiáng)度的波動(dòng)。比較小的熒光團(tuán)彌漫迅速通過(guò)照明量,以產(chǎn)生強(qiáng)度短,隨機(jī)掃射。與此相反,較大的復(fù)合物(熒光團(tuán)結(jié)合到大分子)移動(dòng)更慢,產(chǎn)生更長(zhǎng),更持續(xù)時(shí)間依賴性熒光強(qiáng)度的圖案。

  • 熒光和DIC顯微鏡結(jié)合 - 結(jié)合兩個(gè)***的對(duì)比度增強(qiáng)的光學(xué)顯微鏡技術(shù),熒光和微分干涉對(duì)比(DIC)可以耦合到圖像的細(xì)節(jié),同時(shí)觀察活細(xì)胞中加入熒光基團(tuán)的分布。因?yàn)镈IC需要結(jié)構(gòu)復(fù)雜的偏振片和雙折射分光鏡(Nomarski或Wollaston棱鏡)使用透射光,對(duì)物鏡視場(chǎng)圖像必須被分別與反射光的熒光得到。由此產(chǎn)生的圖像結(jié)合(覆蓋)空間映射的熒光強(qiáng)度作為細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能。在某些情況下,熒光顯微鏡雙色鏡可以用來(lái)作為一個(gè)偏振器(分析器)使在這兩種模式同時(shí)成像。

  • 熒光濾光片組 - 通常安置在方形光塊,熒光濾波器組組成的激發(fā)和屏障(排放)以及一個(gè)雙色鏡濾波器。過(guò)濾塊位于垂直照射,以上的目的,使入射光可以通過(guò)激發(fā)濾光片和雙色鏡反射從表面到樣品。由試樣發(fā)出的熒光是由目的收集并通過(guò)雙色鏡傳送到目鏡或探測(cè)器系統(tǒng)。熒光濾波器組對(duì)各種過(guò)濾器的組合來(lái)減少過(guò)濾器之間的串?dāng)_和*大熒光強(qiáng)度的帶通區(qū)域匹配的記錄。

  • 熒光原位雜交FISH)- 沒(méi)有直接關(guān)系的水生生物,熒光原位雜交技術(shù)是基于使用熒光標(biāo)記的單鏈的互補(bǔ)序列(稱作cDNA的)染色體DNA的靶序列之間的雜交,以確定特定的基因序列的位置。在一個(gè)方法稱為直接FISH,熒光染料被直接耦合到互補(bǔ)的核酸探針,以使探針 - 靶雜交復(fù)合物,以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。熒光標(biāo)記的抗體的雜交后,以放大熒光信號(hào)和擴(kuò)大可用于多個(gè)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的熒光團(tuán)的數(shù)目間接FISH包括結(jié)合到互補(bǔ)探針。

  • 熒光壽命 - 特征時(shí)間,一個(gè)分子返回到基態(tài)之前保持在受激狀態(tài)。在激發(fā)態(tài)壽命,熒光團(tuán)能夠經(jīng)歷構(gòu)象變化,以及與它的本地環(huán)境相互作用。的熒光壽命被定義為其中一個(gè)熒光團(tuán)的初始熒光強(qiáng)度衰減到初始強(qiáng)度的1 / e(約37%)的時(shí)間。這個(gè)量是從激發(fā)態(tài)到基態(tài)的熒光衰減的速率常數(shù)的倒數(shù)。

  • 熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM)- 一個(gè)成熟的技術(shù),使兩者的熒光壽命和整個(gè)圖像中的每一個(gè)位置的熒光基團(tuán)的空間位置同時(shí)記錄。該方法提供了一種機(jī)制來(lái)研究環(huán)境參數(shù),如pH,離子濃度,溶劑的極性,和在單個(gè)活細(xì)胞的氧張力,呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)在一個(gè)時(shí)間和空間陣列。的納秒的激發(fā)態(tài)壽命的FLIM測(cè)量是獨(dú)立的本地化的熒光團(tuán)的濃度,光漂白效應(yīng),和路徑長(zhǎng)度(試樣厚度),但激發(fā)態(tài)反應(yīng)如共振能量轉(zhuǎn)移的敏感。

  • 在漂白熒光丟失(FLIP)- 在相關(guān)的FRAP的技術(shù),一個(gè)限定的活細(xì)胞內(nèi)的熒光的區(qū)域進(jìn)行重復(fù)漂白由照明用強(qiáng)烈照射。在一個(gè)測(cè)量時(shí)間段,這個(gè)動(dòng)作將導(dǎo)致熒光信號(hào)的完全丟失整個(gè)細(xì)胞如果所有的熒光團(tuán)能夠擴(kuò)散到正被光漂白的區(qū)域。通過(guò)計(jì)算,在其中的熒光從整個(gè)單元熄滅的速率,物鏡熒光團(tuán)的擴(kuò)散遷移率可以被確定。

  • 熒光顯微鏡- 在光學(xué)顯微鏡的一種流行的臨床和研究的技術(shù)依賴于熒光分子的激發(fā)與一個(gè)特定的波長(zhǎng)區(qū)域產(chǎn)生一個(gè)圖像在更長(zhǎng)的波長(zhǎng)的熒光發(fā)射產(chǎn)生的次級(jí)。現(xiàn)代熒光顯微鏡配備有反射光照明,將中性密度過(guò)濾器和專業(yè)相結(jié)合的干涉濾光片分離入射光從所檢測(cè)到的熒光發(fā)射。

  • 熒光相差顯微鏡結(jié)合- 傳統(tǒng)相襯光學(xué)上可加上熒光顯微鏡來(lái)觀察活的熒光團(tuán)和固定細(xì)胞的空間分布和映射的發(fā)光強(qiáng)度,以特定的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。因?yàn)橄辔粚?duì)比技術(shù)需要發(fā)送一個(gè)與一個(gè)環(huán)狀孔(聚光鏡環(huán)形)改性并檢測(cè)到與空間濾波器(相板),其定位在所述物鏡后焦平面光照度,視場(chǎng)必須被獨(dú)立地選自熒光,以便捕獲以獲得*佳的對(duì)比度。然后將得到的圖像進(jìn)行組合(疊加)在空間上映射熒光強(qiáng)度作為蜂窩結(jié)構(gòu)的函數(shù)。部分廠家報(bào)價(jià)低密度相板,使活細(xì)胞的相襯和熒光的同時(shí)成像。

  • 熒光漂白后恢復(fù)(FRAP)- 平移移動(dòng)(橫向擴(kuò)散系數(shù))的熒光標(biāo)記的大分子和小分子可以通過(guò)光漂白恢復(fù)技術(shù)確定。在FRAP,非常小的,選定的區(qū)域(直徑為幾微米)受到強(qiáng)烈的照明,通常用激光,以產(chǎn)生完整的光漂白熒光團(tuán)在該地區(qū)。其結(jié)果是一個(gè)戲劇性的減少或消滅熒光。在光漂白速率和脈沖,在漂白區(qū)熒光強(qiáng)度的恢復(fù)程度監(jiān)測(cè)作為時(shí)間的函數(shù)產(chǎn)生的熒光團(tuán)和恢復(fù)的動(dòng)力學(xué)類型信息。

  • 熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET)- 共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象的一種適應(yīng)熒光顯微鏡以獲得定量的時(shí)間和空間的蛋白質(zhì),脂質(zhì),酶的結(jié)合和相互作用的信息,和在活細(xì)胞中的核酸。FRET顯微鏡是利用穩(wěn)態(tài)和時(shí)間分辨技術(shù)進(jìn)行的,但時(shí)間分辨FRET成像具有更準(zhǔn)確的映射的供體-受體的距離。一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的熒光顯微鏡配備適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射濾波器和一個(gè)敏感的攝像機(jī)可以進(jìn)行FRET成像。

  • 熒光斑點(diǎn)顯微鏡(FSM)- 一個(gè)廣角和共聚焦顯微鏡采用熒光標(biāo)記的亞基濃度很低的兼容技術(shù)(例如,微管蛋白)減少熒光遠(yuǎn)離焦平面,從而提高活細(xì)胞較厚的區(qū)域的標(biāo)記的結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)的能見度。這是通過(guò)標(biāo)記只有一小部分的感興趣的整個(gè)結(jié)構(gòu)完成。熒光斑點(diǎn)顯微鏡已經(jīng)非常有用的定義運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞骨架元素的聚合動(dòng)力學(xué),如肌動(dòng)蛋白和微管,在活細(xì)胞中。

  • 熒光染料 天然或合成的染料或分子,其能夠表現(xiàn)出的熒光。熒光染料(也稱為熒光分子,探針,或熒光染料)通常含有氮,硫和/或氧與離域電子系統(tǒng)和反應(yīng)性部分,使附加到一生物物種中的化合物的多核雜環(huán)分子。

  • 熒光 - 結(jié)構(gòu)域或一個(gè)分子能夠表現(xiàn)出熒光的特定區(qū)域。熒光物質(zhì)可分為兩大類,內(nèi)在的和外在的。固有熒光的生物結(jié)構(gòu)和其他材料的自然發(fā)生。外在的熒光基團(tuán)被添加到一個(gè)試樣不顯示所需的光譜(熒光)的性質(zhì)。在許多情況下,熒光團(tuán)是由一個(gè)小的芳香分子(熒光染料)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)或被吸收到一個(gè)更大的大分子。典型的例子包括吖啶橙插層的連續(xù)的DNA的堿基對(duì)之間,在結(jié)合蛋白或抗體的熒光基團(tuán),和四吡咯環(huán)系統(tǒng)中的葉綠素。

  • 康登原理 - 一個(gè)基本概念的熒光現(xiàn)象,這是基于這樣一個(gè)事實(shí):分子核電子躍遷期間是固定的(由垂直線在康登或雅布倫斯基圖)。從基態(tài)躍遷到能量較高的電子激發(fā)態(tài)在如此短的時(shí)間內(nèi)發(fā)生(測(cè)量飛秒),核沒(méi)有足夠的時(shí)間使。因此,*的電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),可以是那些在基態(tài)和激發(fā)態(tài)的電子位置的概率*大重疊。

  • 半高全寬(FWHM)- 由玻璃或干涉濾光片透射波長(zhǎng)的帶通區(qū)域是由一個(gè)參數(shù),稱為全寬度半*大值描述(簡(jiǎn)稱FWHM)。在切斷邊界切定義為上下波長(zhǎng)產(chǎn)生的*大透射率百分之五十的過(guò)濾器,和中心波長(zhǎng)(CWL)在通帶波長(zhǎng)區(qū)域的算術(shù)平均值。例如一個(gè)寬度為40表示傳輸帶寬跨越40納米,可以為在紫外,可見或紅外區(qū)域的任何地方。寬也被稱為半帶寬(HBW許多教科書)。

  • 綠色熒光蛋白(GFP) - 從水母來(lái)源的天然蛋白的熒光探針水母這是通常使用的,以確定位置,濃度,相互作用,并在活細(xì)胞和組織的物鏡蛋白的動(dòng)力學(xué)。激發(fā)光譜和發(fā)射光譜增強(qiáng)

    綠色熒光蛋白基因(遺傳衍生物)在489納米和508納米有*大值,分別為。為了將綠色熒光蛋白(或其任何遺傳衍生物)進(jìn)入細(xì)胞,該基因的DNA序列連接到編碼感興趣的蛋白質(zhì)的DNA。在培養(yǎng)的細(xì)胞被轉(zhuǎn)染的DNA修飾,它們能夠表達(dá)嵌合熒光蛋白在顯微鏡下觀察。
  • 諧波顯微鏡(HGM)- 諧波發(fā)生時(shí),光激發(fā)事件涉及在多個(gè)諧波頻率在特定合作發(fā)射結(jié)果兩個(gè)或兩個(gè)以上的光子(主要是,第二和第三)沒(méi)有對(duì)光子的吸收。諧波頻率的產(chǎn)生本質(zhì)上是一個(gè)非線性散射過(guò)程產(chǎn)生的發(fā)射光子波長(zhǎng)的兩倍的頻率或波長(zhǎng)的一半(倍頻)的入射光照明。光學(xué)顯微鏡,透明標(biāo)本缺乏對(duì)稱性與諧波技術(shù)成像的理想人選。不像典型的探針與傳統(tǒng)熒光顯微鏡的照明技術(shù)的現(xiàn)狀,改變激發(fā)光波長(zhǎng)的發(fā)射波長(zhǎng)產(chǎn)生相應(yīng)的變化。此外,所發(fā)射的光的相干和保留樣品的相位信息。

  • 熱鏡 - 專業(yè)雙色干擾濾波器通常采用熱量反射回光源的光學(xué)系統(tǒng)的保護(hù)。熱鏡可以用來(lái)插入到光學(xué)系統(tǒng)的入射角為零度和45度之間變化,并且是有用的各種應(yīng)用在生熱會(huì)損壞組件或照明光源的光譜特性的影響。波長(zhǎng)從750到1250納米的紅外熱反射鏡系列。通過(guò)發(fā)射可見光而反射紅外熱反射鏡,也可以作為雙色分光鏡在熒光顯微鏡專業(yè)的應(yīng)用。

  • 免疫熒光顯微鏡 -  熒光顯微鏡,分子靶向的物種模式(蛋白質(zhì),核酸,膜,等)標(biāo)本中是高度特異的熒光抗體標(biāo)記。在標(biāo)記抗體已被選定的波長(zhǎng)區(qū)域興奮,二熒光發(fā)射收集的目的形式的標(biāo)本圖像。抗體是通過(guò)聯(lián)軸器直接與熒光標(biāo)記(熒光染料;被稱為直接免疫熒光法),或與第二熒光抗體識(shí)別抗原表位的抗體(間接免疫熒光法)。

  • 增強(qiáng)硅增強(qiáng)靶(ISIT)相機(jī) - 攝像管用于微光成像應(yīng)用,如試樣具有很低的量子產(chǎn)率的熒光顯微鏡。這些電子管基本上是一個(gè)硅增強(qiáng)靶(

    )管的像增強(qiáng)器耦合的光纖作為*光放大階段加入改性。

  • 干擾濾波器- 一個(gè)濾波器的透射或反射的波長(zhǎng)的一個(gè)特定的區(qū)域或帶,在熒光顯微鏡中常用的分離激發(fā)光的熒光發(fā)射。干擾濾波器是通過(guò)幾種絕緣材料或絕緣材料和金屬薄膜的連續(xù)層的交替層的制備。介電層之間的間距(或之間的介電層和金屬層)都僅限于1/4或半個(gè)波長(zhǎng)允許建設(shè)性干涉和加強(qiáng)傳播的光通過(guò)濾波器在特定波長(zhǎng)。所有其它波長(zhǎng)的光產(chǎn)生破壞性干涉,吸收或反射,但不通過(guò)過(guò)濾器。

  • 內(nèi)在的生命周期 - 定義為在任何過(guò)程,競(jìng)爭(zhēng)激發(fā)態(tài)失活沒(méi)有電子激發(fā)態(tài)的壽命,固有壽命測(cè)量的熒光的衰減速率常數(shù)的倒數(shù)。在實(shí)踐中,熒光壽命的測(cè)量是一個(gè)組合的固有熒光壽命和非熒光過(guò)程(淬火,非輻射弛豫,等)導(dǎo)致的激發(fā)態(tài)弛豫。測(cè)得的壽命總是小于固有壽命和量子產(chǎn)率的一個(gè)指標(biāo)。

  • 等色點(diǎn)- 一個(gè)色點(diǎn)通常觀察時(shí)的激發(fā)或發(fā)射光譜的熒光染料進(jìn)行化學(xué)或物理反應(yīng)的平衡是作為一個(gè)記錄每個(gè)物種的濃度的函數(shù)。曲線的發(fā)射與波長(zhǎng)(或頻率)這樣的混合物通常會(huì)在一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)相交(波長(zhǎng)),稱為色點(diǎn)。效果也可能為一組的兩個(gè)或更多無(wú)關(guān)的光譜中出現(xiàn),非相互作用的熒光染料具有相同的總濃度。在一個(gè)單一的化學(xué)物種,色點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)在所有波長(zhǎng)的摩爾消光系數(shù)相等。作為一個(gè)例子,該熒光染料Fura-2激發(fā)光譜顯示一個(gè)色點(diǎn)在362納米時(shí),稀溶液進(jìn)行滴定鈣。

  • 雅布倫斯基圖- 一個(gè)能級(jí)的熒光分子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)電子占據(jù)的圖形化描述。單重態(tài)和三重激發(fā)態(tài)通常分別說(shuō)明了,但附近的另一。雅布倫斯基圖確定的電子態(tài)和振動(dòng)能級(jí)的能量的相對(duì)位置作為一系列的水平線。國(guó)與國(guó)之間的電子躍遷是由垂直線表示(激發(fā)和發(fā)射),而內(nèi)部轉(zhuǎn)換,振動(dòng)弛豫,淬火現(xiàn)象的波形垂直線表示。系統(tǒng)中的單重態(tài)和三重態(tài)之間的交叉的斜直線或波浪線描繪。

  • 液晶可調(diào)諧濾波器(LCTF)- -電子控制裝置,使光成像質(zhì)量過(guò)濾而提供光學(xué)顯微鏡清晰孔徑。這些過(guò)濾器操作通過(guò)一系列的波片是由雙折射材料層和液晶層,夾在兩個(gè)線性偏振器之間。液晶層的雙折射是通過(guò)改變施加到透明導(dǎo)電層相鄰的層電壓微調(diào)。偏振光進(jìn)入濾波器進(jìn)行波長(zhǎng)依賴旋轉(zhuǎn)的波片,其衰減和轉(zhuǎn)換成由分析儀的幅度變化(第二偏振器)。LCTFs旨在控制通過(guò)改變液晶的雙折射特性和串聯(lián)使用多個(gè)波片參數(shù)濾波。

  • 長(zhǎng)通(LP)濾波器- 一種光學(xué)干涉或有色玻璃濾光片衰減較短的波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)較長(zhǎng)(通過(guò))對(duì)物鏡光譜的活動(dòng)范圍(紫外,可見,或紅外)。長(zhǎng)通濾波器,它可以有一個(gè)非常陡(簡(jiǎn)稱邊緣

    過(guò)濾器),通過(guò)對(duì)波長(zhǎng)的峰值在傳輸百分之50切。在熒光顯微鏡,長(zhǎng)通濾波器常用于雙色鏡和屏障(排放)過(guò)濾器。使用舊的術(shù)語(yǔ)高通
    描述長(zhǎng)通濾波器是不要因?yàn)樗鼫?zhǔn)確地指的是頻率而不是波長(zhǎng)。
  • 發(fā)光 - 從任何物質(zhì)的光的發(fā)射(通常是一個(gè)分子或原子)發(fā)生從電子激發(fā)態(tài)的產(chǎn)生可以通過(guò)物理(光吸收),機(jī)械,或化學(xué)機(jī)理。發(fā)光形式分為兩類,熒光磷光,這取決于激發(fā)態(tài)的電子結(jié)構(gòu)和排放途徑。產(chǎn)生的發(fā)光可以通過(guò)紫外線或可見光光子激發(fā)發(fā)生(光致發(fā)光),電子束(陰極射線發(fā)光),應(yīng)用熱(熱釋光),化學(xué)能量(化學(xué)發(fā)光),生化酶反應(yīng)(驅(qū)動(dòng)生物發(fā)光),或者通過(guò)能量從機(jī)械的動(dòng)作(摩擦發(fā)光),如摩擦。

  • 微通道板 - 一個(gè)板,包括一個(gè)緊湊的陣列與金屬壁的毛細(xì)管,這是專為二代放大光電子信號(hào)(高代)圖像增強(qiáng)器。從增強(qiáng)靶光電子被加速到板,經(jīng)過(guò)多次的碰撞和與管壁的電子放大的事件,導(dǎo)致在一個(gè)大的電子級(jí)聯(lián)和原來(lái)的光子信號(hào)放大。微通道板是用于檢測(cè)在熒光顯微鏡非常微弱的發(fā)射信號(hào)。

  • 鏡像規(guī)則 - 熒光發(fā)射光譜通常是激發(fā)光譜的鏡像時(shí)的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)波數(shù)(相對(duì)于波長(zhǎng))的函數(shù)作圖。發(fā)生這種現(xiàn)象是因?yàn)槭芗る娮踊氐揭粋€(gè)特定基態(tài)振動(dòng)能級(jí)的概率有關(guān)的相似的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能量狀態(tài)之間在地面上的狀態(tài)與那些存在于激發(fā)態(tài)的程度。實(shí)際上,*可能的返回通路對(duì)電子從第零振動(dòng)基態(tài)中的*激發(fā)態(tài)的激發(fā)過(guò)渡到第二振動(dòng)水平是從處于激發(fā)態(tài)的第零級(jí)的振動(dòng)的第二振動(dòng)水平,在基態(tài)(來(lái)自S對(duì)激發(fā)(0)=0?S(1)= 2,接著發(fā)射從S(1)= 0至S(0)=2)。

  • 摩爾消光系數(shù)- -廣泛應(yīng)用于光譜的領(lǐng)域,顯微鏡,熒光,摩爾消光系數(shù)通常是由希臘符號(hào)表示εε)和在轉(zhuǎn)換單元的摩爾濃度的吸光度為多種化學(xué)物質(zhì)的單位有用。消光系數(shù)是通過(guò)在參考波長(zhǎng)測(cè)量吸光度(吸收分子的特性)為1摩爾(M)濃度(一摩爾每升)在具有厘米路徑長(zhǎng)度比色皿物鏡化學(xué)。參考波長(zhǎng)通常是*大吸收在紫外和可見光光譜的波長(zhǎng)。消光系數(shù)是一個(gè)分子對(duì)光的吸收能力的直接測(cè)量。

  • 單色- 一束光,是由一個(gè)單一的波長(zhǎng)。單色光的概念是很容易想象,但這一現(xiàn)象,由于海森堡的不確定性原理,實(shí)際上并不存在于自然界中。在實(shí)踐中,單色光確實(shí)不局限于單一波長(zhǎng),而是一個(gè)窄帶組成的兩個(gè)或更多的波長(zhǎng)。即使從激光的單色輻射,激發(fā)原子源,或一個(gè)窄帶干涉濾光片具有可測(cè)量的帶寬。

  • 多重?zé)晒鉃V光片組 - 設(shè)計(jì)用于同時(shí)觀察,顯微攝影,或數(shù)字成像的多個(gè)熒光信號(hào),該濾波器組包含專門的干擾濾波器調(diào)諧通過(guò)兩個(gè)或兩個(gè)以上的波長(zhǎng)區(qū)域。集合中的每個(gè)濾波器的傳輸配置文件包含多個(gè)波峰和波谷的透射和反射特定的激發(fā)和發(fā)射波段類似于傳統(tǒng)的單探頭過(guò)濾器的組合。配準(zhǔn)誤差和圖像的變化時(shí)所發(fā)生的多個(gè)探針依次進(jìn)行單獨(dú)的過(guò)濾器組合與多個(gè)探針濾波器組消除。然而,帶寬的限制,加上拒絕某些波長(zhǎng)不能和傳輸特征的有限的陡度,降低了這些濾波器的性能集比較特定的熒光染料單獨(dú)過(guò)濾器。

  • 近場(chǎng)掃描光學(xué)顯微鏡(NSOM)- 近場(chǎng)成像時(shí)發(fā)生的亞微米光學(xué)探針位于一個(gè)很短的距離的樣本和光通過(guò)在探針**的小孔透射。近場(chǎng)是指尺寸小于一個(gè)波長(zhǎng)的入射光在表面的表面上方的區(qū)域。近場(chǎng)區(qū)內(nèi),瞬逝光不衍射極限的納米空間分辨率是可能的。這種現(xiàn)象使非衍射極限的成像和光譜的樣品,是不可能與傳統(tǒng)的光學(xué)成像技術(shù)。

  • 中性密度(ND)濾波器- 廣泛用于各種光學(xué)顯微鏡的應(yīng)用,中性密度濾光鏡的顏色中性灰(類似玻璃)和旨在減少透射光強(qiáng)均勻分布在一個(gè)小數(shù)量的波長(zhǎng)或整個(gè)波長(zhǎng)光譜不改變照明的光譜分布。中性密度過(guò)濾器是用于控制在熒光顯微鏡的照明強(qiáng)度的理想因?yàn)楦邚?qiáng)度的電弧燈常用的光源不能用可調(diào)電源控制電壓調(diào)節(jié)。

  • 尼普科夫圓盤- 一個(gè)薄的不透明的盤用激光共聚焦顯微鏡產(chǎn)生一個(gè)真實(shí)的圖像,可以目視檢查或記錄在一個(gè)高分辨率的數(shù)碼相機(jī)系統(tǒng)。相反,傳統(tǒng)的單點(diǎn)掃描儀器產(chǎn)生的,是由一個(gè)光電倍增管產(chǎn)生的信號(hào)重建,在計(jì)算機(jī)顯示器上顯示圖像。“尼普科夫圓盤含有微小針孔成千上萬(wàn),這在高速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí),提供并行的微型衍射受限點(diǎn)從每個(gè)針孔試樣的掃描。從樣品的熒光發(fā)射被重新聚焦在磁盤相同的針孔在拒絕的光聚焦在傳統(tǒng)的共聚焦顯微鏡單針孔提供相同的功能。

  • 光學(xué)(分子)熒光筆 光學(xué)鑷子,可選地被稱為一個(gè)單光束激光陷阱采用從通過(guò)紅外激光器發(fā)射的光子流的輻射壓力,以俘獲或捕獲和重新定位微觀對(duì)象,如蛋白質(zhì)包被的珠。這種技術(shù)已被應(yīng)用到測(cè)量由馬達(dá)蛋白運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞粘連的強(qiáng)度產(chǎn)生的力。雖然激光鑷子或*常在寬視場(chǎng)熒光顯微鏡使用時(shí),它們也被并入共聚焦和多光子成像系統(tǒng)。

  • 珀?duì)柼麩犭娭评?- 在數(shù)碼相機(jī)用于熒光顯微鏡的一個(gè)共同特征,Peltier冷卻系統(tǒng)包括一個(gè)雙金屬片的一個(gè)表面上成為熱點(diǎn)和冷的另一個(gè)電流中的應(yīng)用。這些設(shè)備可用于快速和有效地冷卻的電荷耦合器件(CCD)在50和60攝氏度以下,在一個(gè)緊湊的空間環(huán)境溫度。冷卻的CCD相機(jī)系統(tǒng)可以集成電荷的光電二極管中更長(zhǎng)的時(shí)間比傳統(tǒng)的非制冷設(shè)備沒(méi)有顯著增加的噪音水平。

  • 磷光 - 光的輻射(光子)從激發(fā)三重態(tài)在激發(fā)軌道電子具有相同的自旋取向?yàn)榛鶓B(tài)的伙伴。因?yàn)橐粋€(gè)三重態(tài)躍遷到基態(tài)是禁止通過(guò)量子力學(xué)的規(guī)則,磷光發(fā)射速度慢得多(以毫秒到秒)比熒光觀察。在一般情況下,磷光通常不會(huì)觀察到溶液中,其中大多數(shù)化學(xué)和生化環(huán)境,室溫。

  • 光活化 - 基因編碼的熒光蛋白,通常很少或根本沒(méi)有顯示的初始熒光的激發(fā)下,在成像波長(zhǎng),但大大增加其熒光強(qiáng)度在不同的照射激活后(通常較低)的波長(zhǎng),稱為光敏。這表明在蛋白質(zhì)活性,綠色熒光蛋白變體,稱為PA-GFP,是*廣泛的研究。

  • 光漂白(衰落)- 熒光永久損失的分子由于光子誘導(dǎo)化學(xué)損傷或共價(jià)修飾。在一般情況下,漂白時(shí)發(fā)生的熒光發(fā)生系間竄越從單重激發(fā)三重態(tài)。在激發(fā)態(tài)分子通過(guò)與相鄰的氧分子或復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)很容易修改。后者的物種的反應(yīng)將永久破壞的熒光和產(chǎn)生單線態(tài)氧自由基等生物分子的化學(xué)修飾。熒光光漂白后已,它通常不能恢復(fù)。光漂白率可以通過(guò)降低激發(fā)光通量或通過(guò)限制氧濃度大大降低。

  • 光電倍增管(PMT)- 電氣裝置的設(shè)計(jì)和放大的光子信號(hào)采集。入射的光子擊中物鏡的光電倍增管上解放自由電子,被加速到一個(gè)倍增電極依次釋放電子放大的流。幾種光電倍增管的串聯(lián)排列,產(chǎn)生巨大的放大程度從每個(gè)原始光子然后發(fā)送信號(hào)處理電路。不同于面陣探測(cè)器如電荷耦合器件(

    CCD),光電倍增管不形成圖像。

  • 光毒性- 一個(gè)活標(biāo)本過(guò)度暴露于高強(qiáng)度光照損傷。光毒性的水平普遍降低波長(zhǎng)的增加,但這一現(xiàn)象背后潛在的眾多機(jī)制了解甚少。大多數(shù)活細(xì)胞顯示增強(qiáng)的光毒性水平時(shí)同時(shí)暴露于合成的熒光物鏡特定的亞細(xì)胞位置,如細(xì)胞核,線粒體,高爾基體,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

  • 針孔- 在激光共聚焦顯微鏡,可變光闌小孔孔放置在光源和檢測(cè)器使顯微鏡對(duì)試樣中產(chǎn)生焦平面的光學(xué)切片。在濾波器的術(shù)語(yǔ),針孔是指在涂膜小小休息(在干涉濾光片薄膜主要產(chǎn)生粉塵或碎片)由在襯底中的應(yīng)用。針孔的大小是衡量的標(biāo)準(zhǔn)在特定條件下使用的高強(qiáng)度照明。

  • 多色鏡(polychroic分光鏡)- 一種專門的鏡或分束器,是用來(lái)傳輸從試樣的熒光發(fā)射多通帶區(qū)域,而反射其他定義的波長(zhǎng)區(qū)域?qū)?yīng)的激發(fā)帶。多色鏡多波段熒光過(guò)濾器組合為消除登記轉(zhuǎn)移時(shí),成像探針在一個(gè)樣本的關(guān)鍵部件。*復(fù)雜的多色鏡可以反映三個(gè)或更多的激發(fā)帶和發(fā)射至少三個(gè)發(fā)射帶。

  • 量子效率由數(shù)字圖像傳感器行業(yè)常用的一個(gè)術(shù)語(yǔ),量子效率是衡量圖像傳感器的有效性(如電荷耦合器件,CCD)從入射的光子產(chǎn)生電子電荷。定量,量子效率是指一個(gè)參考時(shí)間期間的每一個(gè)光電二極管產(chǎn)生的電子入射光子數(shù)。量子效率的變化是由于傳入的電磁輻射頻率的依賴基板入射波長(zhǎng)的函數(shù)的吸收系數(shù)。在實(shí)踐中,由于二氧化硅,氮化硅薄膜干涉效應(yīng),并在圖像傳感器的表面多晶硅也將導(dǎo)致量子效率的波長(zhǎng)依賴性。大部分廠家目前熱像儀量子效率是一個(gè)陰謀與目的波長(zhǎng)比較。

  • 量子產(chǎn)率- 熒光發(fā)射效率的定量測(cè)量,一種熒光染料或熒光量子產(chǎn)率表示為發(fā)射的光子數(shù)吸收光子數(shù)之比。換句話說(shuō),量子產(chǎn)率表示的概率,一個(gè)給定的激發(fā)熒光產(chǎn)生的光子發(fā)射(熒光)。量子產(chǎn)率通常值0和1之間的范圍內(nèi),與熒光分子探針顯微術(shù)中常用的量子產(chǎn)率的范圍從非常低(0.05或以下)幾乎統(tǒng)一。一般來(lái)說(shuō),高量子產(chǎn)率在大多數(shù)成像應(yīng)用中是可取的。一個(gè)給定的熒光量子產(chǎn)率的變化,有時(shí)大的極端,與環(huán)境因素,如pH值,濃度,溶劑的極性。

  • 淬火- 在熒光發(fā)射由于環(huán)境條件如pH,離子強(qiáng)度,熒光染料的溶劑效應(yīng)降低,或局部高的熒光染料,減少排放的有效濃度。淬火是表現(xiàn)在激發(fā)態(tài)的電子基態(tài)非輻射弛豫。激發(fā)熒光基團(tuán)可以通過(guò)共振能量轉(zhuǎn)移猝滅當(dāng)他們?cè)诳拷荏w分子的激發(fā)態(tài)能量可以轉(zhuǎn)移。

  • 紅色熒光蛋白(RFP)-熒光蛋白來(lái)自海葵屬羽毛,作為熒光探針來(lái)確定位置,濃度,相互作用,并在活細(xì)胞和組織的物鏡蛋白的動(dòng)力學(xué)。為了把RFP進(jìn)入細(xì)胞,該基因的DNA序列連接到編碼感興趣的蛋白質(zhì)的DNA。在培養(yǎng)的細(xì)胞被轉(zhuǎn)染的DNA修飾,它們能夠表達(dá)嵌合熒光蛋白在顯微鏡下觀察。

  • 共振能量轉(zhuǎn)移(RET)- 一個(gè)過(guò)程,在激發(fā)態(tài)的熒光基團(tuán)供體的激發(fā)能量轉(zhuǎn)移到相鄰的(在10納米)受體生色團(tuán)的非輻射,通過(guò)偶極-偶極相互作用。供體和受體的吸收譜帶發(fā)射光譜之間的重疊是通過(guò)這種機(jī)制的能量傳遞要求。能量轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為淬火的供體和受體的存在熒光的增加(敏化)的受體的熒光發(fā)射。

  • 劃痕和挖- 缺陷對(duì)那些在軍事規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)來(lái)衡量光學(xué)表面發(fā)現(xiàn)。劃痕表面缺陷的長(zhǎng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)*過(guò)寬度,同時(shí)挖掘指顆粒和在內(nèi)部或存在嵌入在過(guò)濾器的暴露表面的涂層的小氣泡。劃痕的厚度被測(cè)量并以微米和挖,坑的直徑規(guī)定,并且氣泡被記錄在10微米單位。例如,一個(gè)80/50刮傷/坑過(guò)濾器規(guī)范建立了80微米的劃痕和500微米的挖掘范圍。完整的規(guī)范也限制允許的瑕疵在整個(gè)表面面積的數(shù)量。

    短通(SP)的過(guò)濾器- 光學(xué)干涉或有色玻璃過(guò)濾器,在物鏡光譜(通常是紫外和可見光區(qū)域)的活性范圍衰減較長(zhǎng)的波長(zhǎng)和發(fā)送(傳遞)更短的波長(zhǎng)。短通濾波器,其可具有一個(gè)非常尖銳的斜率(被稱為邊緣過(guò)濾器),是由截止波長(zhǎng)在峰值發(fā)送的50%進(jìn)行說(shuō)明。在熒光顯微鏡中,短通濾波器被經(jīng)常使用在二色反射鏡和激發(fā)濾波器。使用低通的舊術(shù)語(yǔ)來(lái)描述短通濾波器現(xiàn)在氣餒,因?yàn)樗鼫?zhǔn)確地指的是頻率,而不是波長(zhǎng)。

  • 信號(hào)噪聲比(S / N)- -光信號(hào)從樣品的噪聲標(biāo)準(zhǔn)比(光)的背景。噪聲被定義為噪聲分量的方差貢獻(xiàn)的總和的平方根。在噪聲光子有限公司和背景噪聲可以通過(guò)背景信號(hào)的平方根近似的情況下,信噪比定義為標(biāo)準(zhǔn)偏差的樣本信號(hào)區(qū)分背景信號(hào),平均數(shù)。熒光顯微術(shù)中,信噪比可以由過(guò)度的背景信號(hào)由于染色技術(shù)或非常低的信號(hào)從感興趣的探頭妥協(xié)。

  • 硅增強(qiáng)靶(SIT)相機(jī)- 一個(gè)專門的視頻攝像機(jī)所設(shè)計(jì)的低光照條件下,往往為準(zhǔn)熒光顯微鏡下進(jìn)行操作。到SIT攝像管包含一個(gè)光電陰極,可以加速光電子在硅二極管靶板大幅放大信號(hào)。掃描電子束中和隨后的物鏡,而生成包含該信號(hào)一個(gè)電子束電流。

  • 單重態(tài) - 對(duì)于任何多電子系統(tǒng)(在原子和分子),當(dāng)電子自旋都是成對(duì)的,該電子配置被稱為單重態(tài)。的原子或分子的自旋量子數(shù)(S)是在系統(tǒng)內(nèi)的電子自旋的總和的*值。這種系統(tǒng)的多重性被定義為量2S+ 1,并與在單重態(tài)的雙電子系統(tǒng)反平行(配對(duì))旋轉(zhuǎn)時(shí),多重性為1與自旋量子數(shù)是零。

  • 光譜成像 - 它利用硬件一種*的熒光技術(shù)(通常并入到共焦檢測(cè)器單元),以所發(fā)射的光從多個(gè)熒光團(tuán)為獨(dú)立的光譜分量分開。線性分解是所附的計(jì)算過(guò)程中,有關(guān)反卷積,它使用頻譜從每個(gè)熒光團(tuán)就好像它是固定的位置,以分離或UNMIX分量信號(hào)的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。該技術(shù)是可用于區(qū)分不同的熒光團(tuán)具有高度重疊的光譜曲線的**的分析工具。

    線性分解 - 涵蓋具有恒定的照明和觀察進(jìn)行的所有的成像和測(cè)量,穩(wěn)態(tài)熒光是熒光實(shí)驗(yàn)的*常見的類型。試樣被照亮用過(guò)濾的光的連續(xù)梁,以及熒光強(qiáng)度或發(fā)射光譜記錄有一個(gè)檢測(cè)器。后立即暴露于激發(fā)光照的大多數(shù)在熒光顯微鏡觀察的標(biāo)本達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。

    受激發(fā)射損耗顯微鏡(STED)- 展覽空間分辨率*過(guò)衍射極限的限制,受激發(fā)射損耗顯微鏡是一種新興的技術(shù),使用相對(duì)物鏡實(shí)現(xiàn)軸向分辨率低于50納米的。該技術(shù)依賴于在激光器采用同步的激光脈沖激發(fā)熒光團(tuán)和空間協(xié)調(diào)的圓形鋼脈沖消耗發(fā)射掃描焦斑周邊抑制激發(fā)分子熒光。熒光是在現(xiàn)場(chǎng)周圍的抑制,但不在中心,從而大大降低了熒光光斑尺寸與分辨率增加承諾。

  • 斯托克斯移- 包括熒光激發(fā)和發(fā)射的光子能量或波長(zhǎng)之間的差異通常被稱為斯托克斯頻移在喬治G.斯托克斯的榮譽(yù),誰(shuí)*個(gè)觀察到的現(xiàn)象在1852,在劍橋大學(xué)學(xué)習(xí)。在實(shí)踐中,斯托克斯位移的熒光分子的光譜激發(fā)和發(fā)射*大值之間的波長(zhǎng)差的測(cè)定。這個(gè)值變化很大,這取決于熒光染料的電子配置,但范圍可以從幾納米到幾百納米。例如,斯托克斯偏移熒光素是約20納米,而200納米卟啉。斯托克斯的轉(zhuǎn)變是在熒光顯微鏡的偉大的工具,因?yàn)樗狗蛛x的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的干涉濾光片。

  • 表面平整度(過(guò)濾器)- 在光學(xué)應(yīng)用的一個(gè)術(shù)語(yǔ),表面平整度是衡量從一個(gè)**的平面光學(xué)元件表面的偏差。在熒光濾光片設(shè)計(jì)的光學(xué)顯微鏡,表面平整度在相應(yīng)的分?jǐn)?shù)或倍數(shù)綠色可見光波長(zhǎng)的測(cè)量(550納米),橘紅色(630納米),或使用一個(gè)特定的帶通濾波器的中心波長(zhǎng)。當(dāng)平面波從鏡子或過(guò)濾器的表面反射,實(shí)際的波前畸變是兩表面的平面度值。在雙色鏡,表面的平整度是通過(guò)從正面反射的光的波前畸變的測(cè)定(反射)表面。

  • 薄膜干涉涂層- -干擾濾波器的主要組成部分,這些涂層是采用幾種介質(zhì)材料或介電材料和金屬薄膜連續(xù)層的交替層的制備。介電層之間的間距(或之間的介電層和金屬層)都僅限于1/4或半個(gè)波長(zhǎng)允許建設(shè)性干涉和加強(qiáng)傳播的光通過(guò)濾波器在特定波長(zhǎng)。所有其它波長(zhǎng)的光產(chǎn)生破壞性干涉,吸收或反射,但不通過(guò)過(guò)濾器。每一層的干涉膜是無(wú)色的,但在層與層之間的多個(gè)接口創(chuàng)建的思考并通過(guò)干擾選擇性地反映某些波長(zhǎng)和傳播他人,帶有明顯的色彩渲染過(guò)濾器。

  • 時(shí)間分辨熒光- 用于測(cè)量強(qiáng)度和各向異性衰減,時(shí)間分辨熒光測(cè)量依賴于暴露試樣的短光脈沖,在脈沖寬度通常短于熒光的衰減時(shí)間。熒光發(fā)射強(qiáng)度的衰減通常是用高速檢測(cè)系統(tǒng),允許的強(qiáng)度和各向異性是一納秒的時(shí)間尺度上的測(cè)量記錄。

  • 全內(nèi)反射熒光顯微鏡(TIRFM)- 技術(shù)設(shè)計(jì)與光束旅行兩個(gè)不同的折射率的介質(zhì)之間產(chǎn)生的倏逝波熒光標(biāo)記的活細(xì)胞表面探頭。在實(shí)踐中,入射激光束是在臨界角反射(全內(nèi)反射)遇到顯微鏡載玻片和含有細(xì)胞的水介質(zhì)之間的界面時(shí)。在幾納米的表面的熒光團(tuán)的倏逝波激發(fā),而那些遠(yuǎn)不受影響。該技術(shù)通常被應(yīng)用于研究分子與表面的相互作用,該地區(qū)是非常重要的,廣泛的學(xué)科在細(xì)胞和分子生物學(xué)。

  • 透射波前畸變(TWD)- 引入的失真度為平面波時(shí),它是通過(guò)一個(gè)光學(xué)元件透射。透射波前畸變是一個(gè)波長(zhǎng)的分?jǐn)?shù)或倍數(shù)的測(cè)量(通常為550或630納米)。的透射波前產(chǎn)生的表面平整度的變化以及光學(xué)元件的外表面的失真,以及來(lái)自內(nèi)部的不連續(xù)性和折射率不均勻性。

  • 三重態(tài)- 對(duì)于任何多電子體系(原子和分子),當(dāng)電子的自旋不配對(duì)的電子結(jié)構(gòu),稱為三重態(tài)。同時(shí),對(duì)其他量子數(shù)相等的值,較高的多重態(tài)的能量較低的狀態(tài)。因此,一個(gè)激發(fā)態(tài)具有比相應(yīng)的單重態(tài)能量較低的。自旋量子數(shù)(S)原子或分子的電子自旋的總和的*值范圍內(nèi)的系統(tǒng)。這樣一個(gè)系統(tǒng)的多樣性被定義為量2S + 1,和具有平行于三重態(tài)一二電子系統(tǒng)(不成對(duì))的自旋,自旋量子數(shù)為1的重?cái)?shù)是3。

  • 雙光子顯微鏡(多光子)- 一個(gè)衍生技術(shù),激光掃描共聚焦顯微鏡在熒光激發(fā)是基于紅外線或長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見光激光束的能量密度被調(diào)整到允許的頻率增加一倍或兩倍于試樣的光束的聚焦點(diǎn)。在樣品的熒光團(tuán)同時(shí)由兩個(gè)或三個(gè)光子激發(fā)產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的躍遷,相當(dāng)于單光子熒光。例如,兩和三光子激發(fā)在900納米相當(dāng)于450和300納米激發(fā)高能量的光子,分別。多光子顯微鏡能夠深入滲透到厚的組織和消除針孔孔徑的需要,因?yàn)闊晒獍l(fā)射被限制到一個(gè)單一的焦平面。奧林巴斯顯微鏡

  • 體繪制- 技術(shù)使用的算法來(lái)創(chuàng)建任意角度的三維圖像的計(jì)算機(jī)可視化而不需要任何中間轉(zhuǎn)換的集合表示表面幾何數(shù)據(jù)。在激光掃描共聚焦顯微鏡,體積渲染通常是在光學(xué)部分進(jìn)行堆棧從熒光樣品聚集在三個(gè)維度產(chǎn)生試樣的半真實(shí)的模型。

  • 楔形(平行)- 在弧分或從平坦的光學(xué)元件(通常是一個(gè)過(guò)濾器或窗口)的外表面之間平行變化的弧秒的測(cè)量。顯著楔角可以引入一個(gè)角偏差對(duì)波前穿過(guò)元件,從而導(dǎo)致圖像的變化和準(zhǔn)誤差時(shí),視神經(jīng)位于成像路徑。對(duì)于一個(gè)典型的過(guò)濾器元件或窗口,角度偏差的水平為約二分之一的楔角。在內(nèi)部覆蓋表面楔工件可以產(chǎn)生重影圖像,作為離軸內(nèi)部反射的結(jié)果。

  • 變焦 - 在激光掃描共聚焦顯微鏡,變焦倍率控制允許相當(dāng)水平的靈活性以不同掃描在試樣上的光柵區(qū)域,并因此提供在橫向(XY)試樣平面像素尺寸的連續(xù)控制。通過(guò)使顯微鏡的動(dòng)作中符合的兩個(gè)以上的像素每*小光學(xué)分辨圖像點(diǎn)奈奎斯特/ Shannon采樣準(zhǔn)則優(yōu)化圖象信息內(nèi)容的變焦控制協(xié)助。變焦控制通過(guò)調(diào)節(jié)所述電流計(jì)的電流水平調(diào)節(jié)掃描鏡偏轉(zhuǎn)的程度。