尼康顯微鏡藍紫色激發(fā)塊CFP（帶通）

高性能尼康CFP（青色熒光蛋白）濾波器的組合通過采用帶通發(fā)射濾波器，其40納米的通帶（460-500納米）限制檢測到的熒光發(fā)射在不同于藍紫組中的其他三個補青藍光譜區(qū)域。 紫外，可見和近紅外透射該濾波器組的頻譜輪廓下面示于圖1，一種窄的20納米的激發(fā)最小化通帶和自發(fā)熒光是為了避免通常用于雙標記實驗中使用的青色結(jié)合某些熒光染料的激發(fā)熒光蛋白。 雖然主要設(shè)計用于熒光蛋白的成像，此帶通發(fā)射組合是用于獲得具有多個標簽標本圖像時熒光團中的一個是有效地激發(fā)，在藍紫色光譜區(qū)域是有用的。

藍紫色激發(fā)濾光片座CFP規(guī)格：

• 激發(fā)波長篩選：426-446納米（帶通，436 CWL）

• 雙色鏡截止波長：455納米（長通，LP）

• 屏障過濾波長：460-500納米（帶通，480 CWL）

在CFP熒光濾波器集合被設(shè)計以獲得最佳性能與由藍紫色波長激發(fā)青色熒光蛋白，特別是當用于在組合的雙標記技術(shù)具有增強的黃色熒光蛋白利用。 雖然最初設(shè)計為從蛋白質(zhì)的熒光團檢測發(fā)射，該過濾器組合實質(zhì)上是一種帶通發(fā)射藍紫激發(fā)集，并且可以被用于檢查一個寬的吸收光在此光譜區(qū)域的標本光譜。

在CFP組合的激發(fā)帶通一般不激發(fā)黃色熒光蛋白（激發(fā)在513納米），并通過采用帶通發(fā)射濾波器，黃色熒光被排除的檢測時在CFP濾波器集合被使用。 應(yīng)當指出的是，從增強型綠色熒光蛋白的一些信號可能與此濾波器集合檢測到，并且因此該熒光是不是一個好的候選為與青色蛋白質(zhì)變體的雙標記。 在濾波CFP組合建議研究以下熒光團時：ACMA，吖啶同型二聚體，Astrazon黃色，Atabrine，兒茶酚胺，CFP，色霉素A，Genacryl嫩黃，Genacryl黃色，塞夫龍河黃色，SYTO 42（43，44，45），和SYTOX藍色。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明該過濾器組合的性能與各種定位于不同的細胞內(nèi)位置藍紫吸收熒光探針。

示于圖2（a）是從大鼠胸主動脈（肌肉）的細胞進行免疫熒光標記的同隨后綴合的山羊抗小鼠Fab片段初級抗OXPHOS復(fù)合V抑制蛋白的單克隆抗體（小鼠）的培養(yǎng)的熒光發(fā)射強度太平洋藍。 最大吸收太平洋藍的是410納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在455納米。 另外，將試樣同時染色綴合鬼筆環(huán)肽F-肌動蛋白的Alexa Fluor 488（綠色），以及用于DNA與SYTOX橙。 注意沒有信號的同時從橙色和綠色熒光團（SYTOX定位于細胞核會出現(xiàn)這些觀察條件下綠色）。 在許多情況下，SYTOX橙染色多種除了DNA的細胞質(zhì)的元素，盡管這不是顯而易見的圖像中。（奧林巴斯顯微鏡）

圖2（b）展示了從大鼠骨骼肌組織細胞（L6細胞系;成肌細胞）的培養(yǎng)熒光發(fā)射該被免疫熒光標記與綴合到Alexa的初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體，隨后用山羊抗小鼠Fab片段氟430.最大吸收的Alexa Fluor 430的是431納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在541納米。 雖然細胞內(nèi)微管網(wǎng)絡(luò)使用這個協(xié)議重染色，在CFP組合帶通濾波器不通過大量的熒光發(fā)射的來自的Alexa Fluor 430，并產(chǎn)生只有微弱的信號被集中靠近核。 另外，將試樣同時染色F-肌動蛋白的Alexa Fluor 488綴合鬼筆環(huán)肽，以及用于線粒體與MitoTracker紅CMXRos。 注意沒有信號從紅色（MitoTracker）和綠色（Alexa Fluor 488）的熒光團。

從DAPI染色，它的目標在細胞核DNA牛肺動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)熒光發(fā)射強度，是在圖2（c）所示。 最大吸收的DAPI（4'，6-二脒基-2-苯基吲哚）為358納米，并且當熒光被綁定到DNA中的最大發(fā)射發(fā)生在461納米。 另外，將試樣同時沾上BODIPY FL phallacidin（靶向肌動蛋白;綠色發(fā)光）和MitoTracker紅CMXRos（靶向線粒體;紅色發(fā)光）。 注意沒有信號從紅色（MitoTracker）熒光團，但滲出通過從綠色（BODIPY FL）探針，其顯示為圍繞原子核的弱青色信號。 此外，核出現(xiàn)那么激烈，用熒光發(fā)射移位到較長波長比可比的圖像與尼康紫羅蘭和紫外線濾光片組合。

原子核中的小鼠腎薄組織切片（圖2（d））的進行了針對性的核酸探針的DAPI，當在細胞培養(yǎng)物和組織切片結(jié)合到DNA，其具有最大激發(fā)在358納米和發(fā)射最大值在461納米。 此外，在圖2（d）該低溫恒溫器部也同時沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素（腎小球和曲小管）和Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動蛋白和刷狀緣）。 注意沒有信號從紅色（的Alexa Fluor 568）的熒光團，但顯著量滲透入來自綠色（的Alexa Fluor 488）探針青色發(fā)射濾光片。 用紫外線激發(fā)帶通發(fā)射濾光片組，在試樣的暗核會出現(xiàn)明亮的藍色和的Alexa Fluor 488信號將基本上不存在。

圖2（e）表示從大鼠袋鼠腎上皮細胞（PTK2線路）進行免疫熒光標記與初級抗細胞角蛋白（一種中間絲蛋白）的小鼠單克隆抗體的培養(yǎng)，隨后用綴合的山羊抗小鼠Fab片段的發(fā)光強度濱海藍色。 最大吸收碼頭藍的是365納米，并且最大發(fā)射發(fā)生在460納米。 另外，將試樣同時染色線粒體與MitoTracker紅CMXRos。 注意沒有信號從紅色熒光團與該帶通發(fā)射濾波器的組合。 還應(yīng)當指出，在與在CFP濾波器集合較弱信號的缺乏，在藍紫色區(qū)域的結(jié)果顯著吸收匡藍的。

由薄蕨類球果部分自發(fā)熒光發(fā)射強度（ 全緣貫眾 ）組織表現(xiàn)出如圖2（f）所示。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括木質(zhì)素，葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。在藍紫色區(qū)域中，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個顯著量熒光在與400和440納米之間的波長激發(fā)。 注意沒有光譜滲出通過從自體熒光發(fā)射在綠色和紅色光譜區(qū)域與CFP濾波器組合。