徠卡顯微鏡干燥生物樣品準(zhǔn)備的顯微分析
X射線微型計算機斷層掃描(micro-CT)是一種常規(guī)應(yīng)用于非侵入性技術(shù)為生物體的內(nèi)部解剖和形態(tài)的調(diào)查。作為micro-CT的結(jié)果掃描一疊的灰度圖像由一系列在限定的角度時樣品旋轉(zhuǎn)采取突起產(chǎn)生的。自從幾年基于實驗室的micro-CT成像系統(tǒng)的數(shù)量不斷增長使這種技術(shù)可用于研究和應(yīng)用的廣譜。
類似的如掃描電子顯微鏡等成像技術(shù),micro-CT允許研究生物樣品中幾乎所有的條件(如鮮,干或防腐劑內(nèi))。micro-CT是理想的技術(shù)為研究骨骼,牙齒和貝殼在3D,但軟組織的分析,顯著影響,根據(jù)化合物與低原子序數(shù)元素的存在下通過其低的吸收對比度阻礙。為了克服此限制,幾種方法可以應(yīng)用于包括不同的染色和/或干燥技術(shù)以及相相關(guān)對比成像。但是,只要有可能樣品應(yīng)在干燥條件下進(jìn)行分析,因為它提供一個顯著更高的信噪比相比掃描在液體樣品。 為了干燥細(xì)膩的生物樣品,臨界點干燥被校對是* 好的方法相比例如,化學(xué)或空氣干燥,因為它保留了結(jié)構(gòu),同時盡量減少工件,如組織和失真的收縮。
書蝎子肌肉微型計算機斷層掃描協(xié)議
介紹
種類:書蝎(Neobisium SP)。
書蝎與隨后的X射線顯微計算機斷層攝影術(shù)(micro-CT)的臨界點干燥來檢測解剖特征,特別考慮到肌肉組織。
步驟
樣品架:樣品轉(zhuǎn)移到微多孔樣品鍋中,并置于濾盤和多孔盆保持器的腔室。
固定和脫水
乙醇(70%):過夜
乙醇系列(80%,90%,96%,100%):2×10分鐘。
碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):過夜
乙醇(100%):2×10分鐘。
CPD300自動程序
安裝和掃描
干燥樣品膠合昆蟲銷和掃描用Xradia MicroXCT-200 X射線成像系統(tǒng)(卡爾蔡司X射線顯微公司,普萊森頓,美國)。
圖1:一本書蝎子prosoma的容積重建(外視圖和內(nèi)視圖以可視化的肌肉)。伊麗莎白禮貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格賴夫斯瓦爾德,德國大學(xué)。
昆蟲的腦的微型計算機斷層掃描協(xié)議
介紹
種類:吹飛(絲光綠愷撒)
吹的臨界點干燥,隨后的X射線顯微計算機斷層攝影術(shù)(micro-CT),飛來檢測神經(jīng)解剖學(xué)特征。
步驟
樣品支架:將樣品分別放置在節(jié)肢動物保持器的腔室。
固定和脫水
布安固定液:隔夜
0.1M磷酸鹽緩沖液(1.8%蔗糖,pH值7.2):3×10分鐘。
乙醇系列(60%,70%,80%,90%,96%,100%):2×10分鐘。
碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):過夜
乙醇(100%):2×10分鐘。
CPD300自動程序
安裝和掃描
干燥的樣品被粘在昆蟲銷和掃描用Xradia MicroXCT-200 X射線成像系統(tǒng)(卡爾蔡司X射線顯微公司,普萊森頓,美國)。
圖2:容積重建和擊飛的頭部和大腦的虛擬部分。伊麗莎白禮貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格賴夫斯瓦爾德,德國大學(xué)。
昆蟲幼蟲的微型計算機斷層掃描協(xié)議
介紹
品種:紅血蟲(搖蚊幼蟲)
蚊幼蟲與隨后的X射線顯微計算機斷層攝影術(shù)(micro-CT)的臨界點干燥以重構(gòu)內(nèi)解剖結(jié)構(gòu)。
步驟
樣品架:樣品分別放置在節(jié)肢動物持有人的商會。(奧林巴斯顯微鏡)
固定和脫水
2.5%戊二醛(于0.1M磷酸鹽緩沖液):過夜
0.1M磷酸鹽緩沖液(1.8%蔗糖,pH值7.2):3×10分鐘。
乙醇系列(60%,70%,80%,90%,96%,100%):2×10分鐘。
碘染色(在100%乙醇1%碘溶液):過夜
乙醇(100%):2×10分鐘。
CPD300自動程序
安裝和掃描
干燥樣品膠合昆蟲銷和掃描用Xradia MicroXCT-200 X射線成像系統(tǒng)(卡爾蔡司X射線顯微公司,普萊森頓,美國)。
圖3:容積重建和紅血蟲呈現(xiàn)出多種器官系統(tǒng)的虛擬部分。伊麗莎白禮貌和Lipke彼得·米哈利克博士,格賴夫斯瓦爾德,德國大學(xué)。