平場免疫熒光顯微術(shù)指的是旨在觀察上述熒光團的顯微鏡。光學(xué)系統(tǒng)包含一個光源為勵磁 （通常汞燈） 和一個激發(fā)塊來分開熒光激發(fā)光。有許多激發(fā)塊供不同種類的熒光團，可能會切換為連續(xù)查看標本沾有多種類型的熒光團的任何時間。

如圖 1 所示，2 種類型的激發(fā)快和 1 二色鏡的構(gòu)建激發(fā)塊。選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)塊和每次使用鏡子使得研究人員能夠達到一個高的信號信噪比 （S/N） 比之間的熒光和背景光。下文介紹了這些光學(xué)元件的功能。

勵磁激發(fā)塊是將只有激發(fā)光所需的波長從激發(fā)光源 （通常汞燈） 傳遞到熒光基團的光元素。如圖 2 所示，只有激發(fā)波長通過激發(fā)塊，通常"帶通激發(fā)塊"。

二色鏡是分開的熒光激發(fā)光光學(xué)元件。二色鏡是光的特殊的鏡子，反映只有一個特定波長，允許所有其他波長的光線通過 （圖 3）。在平場免疫熒光顯微鏡激發(fā)塊中使用的分色鏡放置在 45 ° 入射角，輕，創(chuàng)建一個"停止帶"的"及格樂隊"的傳輸?shù)墓夂头瓷涞墓狻?/span>光通過勵磁激發(fā)塊被反映 90 ° 朝著這一目標和標本。*后，從試樣所產(chǎn)生的光是通過傳遞和朝向觀察者 （或高靈敏度相機）。

障礙激發(fā)塊分離產(chǎn)生的從其他背景光熒光的熒光的光學(xué)元件。如圖 4 所示，屏障激發(fā)塊傳輸阻塞所有其他輕微泄漏從 （反映從標本或光學(xué)元件） 的激勵燈同時穿過二色鏡熒光波長的光。這是必要的因為熒光光的強度是比*過 100，光靠一個因素的激勵弱 000:1。大多數(shù)障礙激發(fā)塊被放置在一個小的角度，以允許更好的熒光成像通過抑制鬼魂形象。

尼康的平場免疫熒光顯微鏡都有一種專有的稱為"噪音終結(jié)者"的尼康光學(xué)元件 （模型 TE2000 及更高版本）。如圖 1 所示，噪音終結(jié)者允許高效加工的光通過二色鏡傳輸通過防止光線從激發(fā)塊內(nèi)散射和漏入的觀測圖像激發(fā)。這有助于消除背景光噪聲和更有效的熒光圖像。

所選色鏡必須有效分離激發(fā)光和熒光光的波長。具體而言，其透光率截止位于 fluophore 的激發(fā)波長和其熒光波長之間二色鏡必須通過比較鏡子的特性曲線與熒光的波長，鏡子放在 45 ° 入射角時發(fā)現(xiàn)。
如果 fluophore 的激發(fā)波長和其熒光波長關(guān)系密切，斯托克城的轉(zhuǎn)變 （注 1） 是小，然后應(yīng)選擇鏡像與更小的截止波長，讓盡可能多的熒光信號，通過盡可能。

選擇一個激發(fā)塊，允許激發(fā)波長下，順利通過。尤其是當(dāng)汞燈用作光源，有效的激勵被通過線譜的汞燈納入波長。允許之外的目標熒光傳遞激發(fā)波長的波長將既增加背景光和損害標本。如圖 7 所示，激勵效率較低的波長為 440 牛米。