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尼康顯微鏡成像的空間分辨率

2020-09-03 14:40:05

 在數(shù)字圖像而言,空間分辨率指的是在構(gòu)造該圖像的使用的像素的數(shù)目。 具有更高的空間分辨率的圖像是由具有比低空間分辨率的較大數(shù)量的像素。

這種互動式教學(xué)探討變化中的數(shù)字圖像的空間分辨率,并且這些值是如何影響圖像的*終外觀。 本教程初始化與成像題為光學(xué)影像顯微鏡出現(xiàn)在左側(cè)窗口中隨機(jī)抽取樣本。 相鄰的光學(xué)圖像窗口是空間分辨率的窗口,在不同的分辨率是可調(diào)的像素尺寸滑塊顯示拍攝的圖像。 操作教程,從選擇A試片下拉菜單中選擇一個(gè)圖像,而有所不同的像素尺寸(和空間分辨率)的像素尺寸滑塊。 在圖像的水平和垂直軸使用的像素的數(shù)目被直接呈現(xiàn)在滑塊的下方,為的是在整個(gè)圖像組合物中使用的像素的總數(shù)。

數(shù)字圖像的空間分辨率是關(guān)聯(lián)到圖像和用于捕捉圖像的顯微鏡的光學(xué)分辨率空間密度 。包含在每個(gè)像素之間的數(shù)字圖像和距離的像素的數(shù)目被稱為采樣間隔 ,這是數(shù)字化設(shè)備的精度的函數(shù)。 光學(xué)分辨率的顯微鏡的解決存在于原始樣品中的細(xì)節(jié)的能力的度量,并且是關(guān)系到光學(xué)傳感器和電子除了空間密度(像素的數(shù)字圖像的數(shù)量)的質(zhì)量。 在情況下的顯微鏡的光學(xué)分辨率優(yōu)于空間密度,然后將得到的數(shù)字圖像的空間分辨率僅受空間密度的限制。

包含在數(shù)字圖像中的所有細(xì)節(jié),從非常粗到極其精細(xì),是由亮度轉(zhuǎn)換,不同層次光明與黑暗之間的循環(huán)。 亮度轉(zhuǎn)換之間的循環(huán)速率是已知的作為圖像的空間頻率 ,以對應(yīng)于較高的空間頻率更高的速率。 亮度在通過顯微鏡觀察標(biāo)本不同水平是常見的,與背景通常包括一個(gè)均勻的強(qiáng)度和樣品表現(xiàn)出的亮度水平的光譜。 的地區(qū),該強(qiáng)度是相對恒定的(如背景),空間頻率僅略有變化橫跨視場。 另外,許多標(biāo)本的細(xì)節(jié)往往表現(xiàn)出光明與黑暗與強(qiáng)度的之間的廣色域的極端。

每個(gè)像素的數(shù)字圖像中的數(shù)值表示平均*過采樣間隔的光學(xué)圖象的強(qiáng)度。 因此,背景強(qiáng)度將包括像素的相對均勻的混合物,而試樣通常會包含像素值范圍從非常暗到非常亮。 一種數(shù)字照相機(jī)系統(tǒng)的準(zhǔn)確捕捉所有這些細(xì)節(jié)的能力取決于采樣間隔。 看到的,比數(shù)字采樣間隔小(具有較高的空間頻率)的顯微鏡功能將不會在數(shù)字圖像準(zhǔn)確地表示。 奈奎斯特準(zhǔn)則規(guī)定的采樣間隔等于*高樣本空間頻率的兩倍,以精確地保持空間分辨率在所得到的數(shù)字圖像。 等效的措施是香農(nóng)的抽樣定理 ,其中指出,在數(shù)字化設(shè)備必須使用一個(gè)采樣間隔不大于所述光學(xué)圖像的*小可分辨特征的二分之一的尺寸更大。 因此,捕捉細(xì)節(jié)的*小程度存在于一個(gè)樣本,采樣必須發(fā)生的速率足夠快,以使得至少兩個(gè)樣本被收集的每個(gè)特征,保證空間周期的光亮和黑暗的部分由聚集成像裝置。

如果發(fā)生的速度比通過任一奈奎斯特準(zhǔn)則或香農(nóng)定理需要較慢的試樣的取樣,具有高空間頻率的信息將不會被精確地表示在*后的數(shù)字圖像。 在光學(xué)顯微鏡下,對光學(xué)圖像的分辨率的阿貝極限是0.22微米,這意味著一個(gè)數(shù)字轉(zhuǎn)換器必須能夠取樣在對應(yīng)于試樣空間到0.11微米或更小的間隔。 該樣品試樣,每行掃描線512分將產(chǎn)生鑒于約56微米(512×0.11微米),*大水平領(lǐng)域的數(shù)字化儀。 如果過少的像素被用于獲得樣本,則所有的包含在試樣中的空間細(xì)節(jié)將不存在于*終的圖像。 相反,如果過多的像素是由所述成像裝置(通常為過量的光學(xué)倍率的結(jié)果)聚集,不需要額外的空間信息被得到,并且該圖像被認(rèn)為是已被過采樣 。 額外的像素不理論上向空間分辨率,但往往可以幫助改善從數(shù)字圖像拍攝功能的測量的準(zhǔn)確度。 為了確保有足夠的采樣高分辨率成像,2.5?3個(gè)樣品的*小可分辨特征的間隔建議。

大多數(shù)數(shù)碼相機(jī)連接到現(xiàn)代顯微鏡有一個(gè)固定的*大采樣間隔,不能調(diào)整,以符合試樣的空間頻率。 選擇的攝像機(jī)和數(shù)字化儀的組合,能夠滿足顯微鏡放大倍數(shù)和標(biāo)本特征的*小空間分辨率的要求是很重要的。 如果采樣間隔*過所必需的特定樣品,所得到的數(shù)字圖像將包含更多的數(shù)據(jù)比是必要的,但沒有空間信息將會丟失。

在該教程中,作為像素尺寸滑塊被移動到右側(cè)時(shí),數(shù)字圖像的空間頻率被線性地降低。 空間頻率使用范圍為175 X 175像素(30,625總像素)下降到6×6像素(36總像素)到頻域范圍內(nèi)提供可能的解決方案具有廣泛的自由度。 當(dāng)滑塊被移動到右側(cè)(減少像素的數(shù)字圖像的數(shù)量),試樣細(xì)節(jié)進(jìn)行采樣,在越來越低的空間頻率和圖象細(xì)節(jié)被丟失。 在*低空間頻率, 象素發(fā)生阻塞 (通常被稱為像素化 )和口罩大部分的圖像特征。