奧林巴斯顯微鏡共聚焦顯微鏡的詞匯
吸光度(Optical Density) -光通過化學(xué)或生物物質(zhì)的測定的分光光度計或類似的裝置所吸收的量。 吸光度的單位是等于倒數(shù)透射率(透射光強度對入射光強度之比)的對數(shù)。 吸收帶通常覆蓋一個較寬波長范圍內(nèi)(數(shù)十或數(shù)百個),并通常繪制成強,傳輸,或光密度與波長的關(guān)系。
聲光可調(diào)諧濾波器(AOTF) -其利用聲波來調(diào)制光通過激光或非相干照明源(主要是電弧放電燈)發(fā)出的光的波長或強度的過濾設(shè)備。 該過濾器由一個專門的晶體,諸如碲氧化物或石英,一個聲換能器和吸收器以誘導(dǎo)站在聲波具有高和低折射率交替的域夾著的。 如任一偏振光或非偏振光穿過過濾器,該晶體作為衍射光柵偏轉(zhuǎn)入射光束。 特定波長的光被通過改變輸送到晶體的聲波的頻率,從而改變衍射光柵的周期選定。
吖啶橙 -含吖啶核,其中結(jié)合DNA和RNA通過連續(xù)的堿基對之間插來產(chǎn)生一個**的,但很寬的發(fā)射帶在綠色到紅色的波長區(qū)域A氮雜環(huán)發(fā)色團。 吖啶橙是由藍(lán)綠色激光(488納米)或由耦合到電弧放電燈(汞或氙氣)的紫外線,紫色和藍(lán)色干涉濾光片激發(fā)。 熒光團是一個很好的候選,用于顯示許多蜂窩結(jié)構(gòu),但是因為寬的發(fā)射光譜不用于多探針染色是有用的。
Alexa Fluor染料 -合成熒光共軛染料,由Molecular Probes公司的商標(biāo),是用于標(biāo)記抗體,核酸,并作為蛋白質(zhì)一般有用的探針,細(xì)胞骨架分子,脂質(zhì),和一般的神經(jīng)。 激發(fā)和發(fā)射光譜的Alexa Fluor染料跨越紫外區(qū)域和整個可見光光譜的更高波長的部分,甚至延伸到近紅外頻率。 在一般情況下,的Alexa Fluor染料是很**的高穩(wěn)定性和抗光漂白。
衰減(Blocking)等級 -減少的可見光或紫外線光信號或抑制前的光學(xué)系統(tǒng),例如在熒光顯微鏡中被檢測到。 衰減的程度,通常表示在特定波長或波長范圍的相對強度或*光密度的函數(shù)。 衰減,也被稱為調(diào)制的光強度或堵塞 ,可以完成與中性密度濾光片或聲光可調(diào)諧濾波器(AOFT)在共聚焦顯微鏡。
自體熒光(Primary Fluorescence) -背景熒光由于內(nèi)源性代謝物和有機或無機存在于生物標(biāo)本等材料熒光化合物的產(chǎn)生。 在某些情況下,自發(fā)熒光是足夠高的強度,以與來自熒光標(biāo)記的分子的預(yù)期信號相混淆的。 自身熒光在生物細(xì)胞和組織的常見來源是黃素,黃素蛋白和核苷酸(FAD和FMN),B族維生素,還原吡啶核苷酸(NADH和NADPH),脂肪酸,細(xì)胞色素,卟啉,lipofuchsin顏料,色胺和兒茶酚胺。 自體熒光在植物細(xì)胞中的葉綠素(紅色熒光)和木質(zhì)素(綠色熒光)主要派生。 一般情況下,自發(fā)熒光發(fā)射*大的時候活細(xì)胞檢查與藍(lán)色和紫外線激發(fā)波長。
自動熒光細(xì)胞圖像分析儀(AFIC) -再加上電腦顯微系統(tǒng)(反射光熒光顯微鏡,低光級相機和計算機),使染色標(biāo)本的可靠,準(zhǔn)確的檢測高速自動篩選熒光探針的應(yīng)用的幾乎所有的細(xì)胞。 在臨床標(biāo)本中的疾病標(biāo)志物可以使用這種技術(shù),通過使用連接到抗體或核酸特異和敏感的熒光染料進行監(jiān)測。 目標(biāo)熒光團的有選擇性的激勵產(chǎn)生的圖像具有高的信號噪聲比進一步增加檢測的靈敏度。
平均傳輸 -在過濾器的命名法,平均傳輸指的是光在一個特定的區(qū)域(可使用發(fā)送頻帶),而不是在整個頻譜上傳輸?shù)钠骄健?/span> 在一個標(biāo)準(zhǔn)的帶通濾波器,平均透射區(qū)域橫跨全寬的傳輸頻帶的半*大值(FWHM)。 在長通和shortpass過濾器,該術(shù)語表示過去的切口上和截止波長的發(fā)射波長區(qū)域,分別為。
背景 -探測光(噪聲),是不是從一個熒光探針的發(fā)射信號的一部分。 背景噪聲來源包括激發(fā)和發(fā)射濾光片之間的串?dāng)_,從激發(fā)和發(fā)射濾光片文物針孔泄漏的光,在安裝介質(zhì)中,非特異性熒光染色,數(shù)碼攝像系統(tǒng)電子噪聲,以及自發(fā)熒光熒光的出血。 理想情況下,在熒光顯微鏡的背景應(yīng)該是漆黑*大化的標(biāo)本對比度。
帶通濾波器 -雖然有衰減光的波長更短的兩個比通帶較長的傳輸定義的波長區(qū)域(或帶)的濾波器。 發(fā)送的頻帶的中心波長被稱為中心波長 (通常簡寫CWL)。 的有效帶寬是由全寬半高(FWHM)的傳輸,可以將可選地稱為半帶寬(HBW)表示。 帶通濾波器通常采用的激勵,少的時候,在熒光顯微鏡作為屏障過濾器。
屏障 (Emission)濾波器 -一種光學(xué)濾波器,通常設(shè)計成一個長通或具有定義良好的帶通區(qū)域,其中透射從樣本同時阻止殘余激勵光收集由物鏡的熒光發(fā)射波長。 屏障過濾器通常使用制作彩色玻璃或多個干涉腔,并匹配套,激發(fā)濾光片和二色鏡,以產(chǎn)生*佳的效果。(本文來源:奧林巴斯顯微鏡共聚焦顯微鏡的詞匯)
分束器 -用于分離光的入射波束成被隨后投射在不同方向上的兩個或多個組件的一個常見的光學(xué)裝置。 分束器,可在多種配置以滿足特殊要求。 三目觀察筒組件的光學(xué)顯微鏡利用棱鏡分光器來同時指揮成像光束的目鏡和一個傳統(tǒng)或數(shù)碼相機系統(tǒng)。偏振分束器是由一個晶體的雙折射材料,以產(chǎn)生線偏振光。 在熒光顯微鏡,雙色(通常稱為分色)鏡作為分光鏡反射激發(fā)波長回源,而發(fā)射波長更長的二次熒光發(fā)射到目鏡或探測器。
生物發(fā)光 -一個生化氧化過程,導(dǎo)致能量的釋放作為發(fā)射光。 螢火蟲發(fā)光,這需要酶的熒光素酶催化底物螢光素和分子氧之間的反應(yīng)(以三磷酸腺苷的存在),是生物發(fā)光的一個常用例子。 這種現(xiàn)象發(fā)生在多種海洋生物和昆蟲。
放氣通過(Crossover) -放氣通過時或不需要的波長是通過設(shè)計來阻止它們的光學(xué)濾光器發(fā)生交叉。 效果通常發(fā)生在一個過濾器的設(shè)計不允許波長不包括在帶通區(qū)域的完全相消干涉。 滲出通過也是一個問題,當(dāng)入射光的角度是相對于所述過濾器表面的高度傾斜時,或者當(dāng)熒光染料的激發(fā)和發(fā)射光譜重疊。
籠中的熒光基團 -一籠熒光通常是共價連接到隔離罩部分(通常是一個有機結(jié)構(gòu)),但可以通過光的脈沖光解被釋放( 解籠鎖 )。 典型的熒光染料使用的是硝基芐基衍生物,其鎖定在熒光物質(zhì)成非熒光的互變異構(gòu)形式籠。 各種籠分子已被合成并用于實驗。
發(fā)色團 -天然存在的或合成的顏料具有特征的光吸收,通常含有交替的單鍵和雙鍵或環(huán)狀的芳族或雜環(huán)的共軛程度高的組合。 在光學(xué)顯微鏡,發(fā)色團經(jīng)常提到古典染料,如曙紅,番紅或蘇木,用于組織染色的明場觀察。 因為他們表現(xiàn)出在紫外線,可見光和/或近紅外波段的強吸收光譜熒光探針也被歸類為發(fā)色團。
相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)顯微鏡 -相干反斯托克斯拉曼散射顯微鏡的主要優(yōu)點是,它使生物分子不添加合成的熒光標(biāo)記物或內(nèi)源耦合到熒光蛋白的調(diào)查。 相反,該技術(shù)是基于對目標(biāo)分子的振動特性,并且不要求通過電子通過紫外線或可見光激發(fā)的物種。 在實踐中,快速(皮秒或更低)的激光脈沖在兩個來源的近紅外區(qū)域被聚焦到試樣用的顯微鏡物鏡和光柵掃描在橫向和軸向平面。 該脈沖由一個選定的分子的振動模式是分開的頻率,并生成一個新的光束,其具有的波長比入射光束更短,在目標(biāo)焦點上。 二次波束生成目標(biāo)物質(zhì)的濃度分布,并使得試樣的三維圖像的結(jié)構(gòu)。
相干光 -甲光束,該光束由各個波的振動同相位在同一平面上定義的,但也不一定。 為了維持長距離相同的相位關(guān)系,相干光波必須是單色的(具有相同的波長)。 例如,激光是高度相干的,幾乎單色的,并且通常為線性偏振。
冷鏡 -即工作在很寬的溫度范圍內(nèi),以反映整個可見光光譜,同時非常有效地傳送紅外線的波長一個專門的雙色干擾濾波器。類似于熱鏡,冷鏡可設(shè)計為入射角為零和45度之間的范圍內(nèi),并用多層介質(zhì)膜的構(gòu)造,并以類似于干涉濾光器的方式。 冷鏡可以作為兩色分束器與激光系統(tǒng)反射可見光的波長,而紅外線傳輸。
集電極鏡頭 -在寬視場熒光顯微鏡,聚光透鏡定位在弧放電燈,垂直照明燈之間。 現(xiàn)代lamphouses都配備了一個調(diào)節(jié)旋鈕,使聚光透鏡的翻譯聚焦燈放電等離子體球。 收集透鏡收集的光在很寬的區(qū)域,并指示光,以用于傳輸?shù)奖粰z體的垂直照明的后部。 當(dāng)在熒光顯微鏡被配置為適當(dāng)?shù)目评照彰?,聚光透鏡,用于聚焦在冷凝器(目標(biāo))的前面開口的電弧等離子體的放大的實像。
有色玻璃過濾器 -含設(shè)計吸收特定波長的光,而自由地傳輸其他嵌入式膠體或溶解金屬玻璃過濾器。 在熒光顯微鏡,彩色玻璃濾光片曾一度廣泛使用的激發(fā)和屏障過濾器集和紫外光和紅外光作為有效的阻斷劑。
共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM) -在這種聚焦的激光束橫向掃描沿x和樣本的Y軸的光柵模式光學(xué)顯微鏡的一種流行方式。所發(fā)射的熒光(反射光信號)由一個光電倍增管檢測并在計算機顯示器上顯示的像素。 該像素的顯示尺寸是由電子設(shè)備的采樣率和光柵的尺寸決定。 所發(fā)射的遠(yuǎn)離焦平面信號光子被設(shè)在一個平面上的共焦與試樣的針孔光圈擋。 這項技術(shù)使試樣進行光學(xué)沿z軸截面 。
復(fù)合視圖(Projection View) -通過添加一起沿著共聚焦或多光子熒光顯微鏡z軸獲取的多個光纖段中創(chuàng)建一個看似三維圖像(該技術(shù)也可以用微分干涉對比光學(xué)使用)。 在傳統(tǒng)的寬視場熒光顯微鏡,立體標(biāo)本圖像常常模糊不清由于排放產(chǎn)生的遠(yuǎn)離直接焦平面。 當(dāng)用激光共聚焦顯微鏡采集的同一個圖像往往非常清晰。
相聲 -在描述*小衰減(阻塞)級以上的兩個過濾器放在一起串聯(lián)(背到后端)在指定的范圍標(biāo)準(zhǔn)過濾器命名的術(shù)語。 過濾器的串?dāng)_程度應(yīng)該匹配的激勵和障礙(排放)過濾器熒光集時認(rèn)真考慮。 二色鏡通常包括在熒光濾光器組合串?dāng)_評估。 串?dāng)_降低或消除有助于提供未從乘法染色標(biāo)本,其光譜主要落在了濾波器組的帶寬熒光并發(fā)熒光發(fā)射圖像。
花菁染料 (Cyanine Fluorochromes) -含有一個集中的雜環(huán)苯并惡唑基團,菁染料熒光探針首先由Amersham公司,這是眾所周知的高耐光性,水溶性好,而且比較高效的量子產(chǎn)率的程度銷售。 花青染料找到許多應(yīng)用中,作為蛋白質(zhì),核酸,和亞細(xì)胞組分的熒光標(biāo)記物。 的熒光染料,可以微調(diào)在分子水平上,以產(chǎn)生具有寬的激發(fā)和發(fā)射波長光譜的衍生物,并且可以是在結(jié)構(gòu)上的改變,以控制溶解性,非特異性相互作用(降低背景噪聲),以及靶的反應(yīng)性。
去卷積熒光顯微鏡 -反卷積分析是應(yīng)用算法以沿光(z)的所獲取的圖像的離焦堆棧軸線,以提高特定針對給定圖像平面上或在圖像堆棧多個焦平面光子信號的技術(shù)。 顯微鏡必須配備安裝于焦點齒輪組,以保證圖像采集在樣品焦平面之間的精確定義的時間間隔一個步進電機。 在典型應(yīng)用中,反卷積分析被用于去模糊和從目的使用熒光激發(fā)和發(fā)射的特定焦平面除去失焦的光(盡管對于其他照明模式的技術(shù)中是有用的為好)。 *復(fù)雜的應(yīng)用應(yīng)用去卷積分析對整個圖像堆棧產(chǎn)生投影視圖或三維模型。
Descanning -允許光在共聚焦顯微鏡的樣品發(fā)射到由物鏡收集,并通過掃描鏡到二色鏡折回其路徑返回的過程。 當(dāng)descanning機制是正確對齊,在探測器針孔的熒光圖像現(xiàn)貨維持平穩(wěn),不抖動。
雙色分光器(Dichroic Mirror) -一個干擾過濾器/鏡組合在熒光顯微鏡過濾器常用的設(shè)置來產(chǎn)生傳輸和反射波長之間的清晰的過渡。當(dāng)在相對于入射照明和發(fā)射光束以45度角傾斜時,二色鏡,通過一個90度角到標(biāo)本反映短的激發(fā)波長和直通到目鏡和檢測器系統(tǒng)發(fā)送較長的發(fā)射的熒光波長的光。 制作與干涉薄膜為熒光顯微鏡二色鏡能反射90%以上的激發(fā)光的一個或多個同時發(fā)射約90%的發(fā)射帶的。 二色鏡通常是含有熒光濾光器的光學(xué)塊內(nèi)三濾(激發(fā),障礙,二色鏡)的中心元素。
停留時間 -在共聚焦顯微鏡,指的時間長度,該掃描激光束被允許保持在空間中的單元對應(yīng)于圖像中的單個像素的術(shù)語。 典型地,停留時間介于0.1到1微秒或更長的時間,但設(shè)置的停留很長的時間增加了光漂白速率并降低活細(xì)胞的生存能力。
電子狀態(tài) -在一個原子或分子,而這又決定了負(fù)電荷(電子)的分子中的分布以及分子結(jié)構(gòu)的電子的整體結(jié)構(gòu)。 任何給定的分子可以通過多種電子態(tài)( 地面或多種興奮 )中的一個存在,這取決于總電子能量和電子的自旋對稱的軌道。 在室溫下,大多數(shù)的分子中存在的電子狀態(tài)用*少的能量(基態(tài))。 當(dāng)分子吸收一個光子,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)(激發(fā)態(tài))。
發(fā)射光譜 -通過后,它的原子或分子(熒光染料)的發(fā)射波長的能帶(頻譜)被激勵而從另一個輻射源的光或能量的光子。后的熒光染料已發(fā)射的光子時,它返回到地面層次的能量狀態(tài),并準(zhǔn)備進行激發(fā)和發(fā)射的另一個周期。 通常情況下,熒光發(fā)射光譜,其被繪制為相對強度作為波長的函數(shù),被定位在更長的波長的區(qū)域比刺激激發(fā)光譜(實際上,發(fā)射的平均波長長于激發(fā)的平均波長) 。 此外,熒光發(fā)射光譜的波長范圍和強度分布通常是獨立的激發(fā)波長。
落射照明(Reflected Light) -照明熒光的模式和反射光顯微鏡。 在一個反射或外延結(jié)構(gòu)中,照明源(通常被稱為一個垂直照射器)被放置在試樣上的目標(biāo),這既是聚光和成像透鏡系統(tǒng)的雙重作用的同一側(cè)。 在熒光顯微鏡包含的策略性定位在光路內(nèi),從試樣中的方向的燈反射激發(fā)光并發(fā)射發(fā)射的熒光的目鏡或探測器系統(tǒng)中的二色鏡。
激勵 (Exciter) 過濾器 -從匹配濾波器組(或濾波器立方體)在熒光顯微鏡的光學(xué)列車的*個元素。 激發(fā)濾光片,隨著其在該組貿(mào)易伙伴,通常被裝在垂直(EPI)照明器和過濾器選擇的區(qū)域從寬帶光源(如汞或氙弧光放電燈),以產(chǎn)生波長的激動人心帶為熒光顯微鏡。 激發(fā)濾光片經(jīng)常以使用干涉濾光器技術(shù)的選擇性帶通濾波器,但著色(染色)玻璃它們也可以構(gòu)成。
激發(fā)光譜 -波長的光譜,通常范圍從紫外和可見光光譜,其能夠激發(fā)熒光(原子或分子),以表現(xiàn)出熒光。 通過掃描,通過熒光染料或熒光團的吸收光譜,同時監(jiān)測在一個單一的(峰值)波長的發(fā)射所產(chǎn)生的激發(fā)光譜。 以類似的吸收光譜的方式,激勵是由于受激分子的振動和轉(zhuǎn)動弛豫( 內(nèi)部轉(zhuǎn)換 )變寬。 吸收光譜和激發(fā)光譜是不同的,但往往重疊,有時候,他們幾乎沒有區(qū)別的程度。
濾波器斜率 -光學(xué)濾光器的斜率是在過濾器配置文件中的過渡區(qū)域阻塞和變速器之間的指示。 在一般情況下,過濾器的斜率是由在該過濾器具有一個指定的阻塞電平并改變該區(qū)域的速率的波長來定義。 兩個過濾器可以有相同的截止點或截止波長,但仍然有顯著不同阻隔水平和斜坡。 非常尖銳的斜坡發(fā)射波長的窄帶寬的截止或切上地區(qū),而淺的山坡有大的帶寬。
熒光 -通過該過程的合適的原子或分子,這是瞬時由外部輻射的吸收在適當(dāng)?shù)哪芰克剑ㄍǔJ亲贤夤饣蚩梢姽猓┘ぐl(fā)時,釋放所吸收的能量為具有更長的波長比吸收的能量的光子。 在熒光,電子提升到的激發(fā)軌道的配對(或相反的旋轉(zhuǎn))相對于在基態(tài)軌道的第二電子單重態(tài)。 其結(jié)果,返回電子的基態(tài)是自旋允許的 ,并迅速與光子的伴隨發(fā)射發(fā)生。 熒光激發(fā)和發(fā)射過程通常發(fā)生在不到一納秒。
熒光各向異性 -一個術(shù)語,指熒光團的光致激發(fā),由于吸收偶極矩與傳入的光子的電矢量的瞬時對齊。 類似于激發(fā),由激發(fā)的熒光團的熒光發(fā)射發(fā)生在平行于發(fā)射偶極矩的平面取向。 過渡(偶極)矩為激發(fā)和發(fā)射具有已定義的取向相對于染料分子的分子軸,并且彼此以一定角度隔開。 在激發(fā)態(tài)壽命,熒光團的旋轉(zhuǎn)將其去極化發(fā)射相對于所述聲源矢量,從而產(chǎn)生了一種機制,用以測量包含熒光團的環(huán)境的剛性(粘度)。 熒光各向異性被定義為強度平行于激發(fā)光的偏振電矢量和垂直于所述載體的強度,通過總強度除以發(fā)射之間的差的比率。
熒光相關(guān)光譜(FCS) -用激光掃描共聚焦或多光子顯微鏡用為主,熒光相關(guān)光譜法是一種設(shè)計用來確定在只包含一個或幾個分子,產(chǎn)生對化學(xué)反應(yīng)速率,擴散系數(shù),分子量信息量分子動力學(xué)技術(shù),流速,和聚集。 在FCS,小體積(約1 femtoliter)照射聚焦的激光束以記錄從占用量作為時間的函數(shù)的分子數(shù)或量子產(chǎn)率所產(chǎn)生的自發(fā)熒光強度的波動。 相對較小的熒光擴散迅速通過照射量產(chǎn)生強度短,隨機掃射。 與此相反,更大的復(fù)合物(熒光團結(jié)合到大分子)移動更慢,產(chǎn)生一個更長,更持久的時間依賴性熒光強度的圖案。
熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM) -一種復(fù)雜的技術(shù),可同時記錄兩者的熒光壽命和熒光團的整個圖像中的每個位置的空間位置。 該方法提供了一種機制,調(diào)查環(huán)境參數(shù),例如pH值,離子濃度,溶劑的極性,以及在單個活細(xì)胞中的氧張力,呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)在時間和空間排列。 納秒激發(fā)態(tài)壽命的FLIM的測量是獨立的局部熒光濃度,漂白文物,路徑長度(試樣厚度),但要激發(fā)態(tài)反應(yīng),如共振能量轉(zhuǎn)移敏感。
熒光損失在漂白(FLIP) -在涉及到FRAP,熒光的活細(xì)胞內(nèi)定義的區(qū)域的技術(shù)是通過激烈的照射光照受到反復(fù)漂白。 在一個測量時間段,這個動作將導(dǎo)致熒光信號的完全損失整個細(xì)胞,如果所有的熒光團能夠擴散到正被光漂白的區(qū)域。 通過計算在該熒光從整個細(xì)胞消失的速度,目標(biāo)熒光團的擴散遷移率可以被確定。
熒光顯微鏡 -一個流行的臨床和研究的技術(shù)在光學(xué)顯微鏡,它依賴于熒光分子的激發(fā)與特定的波長區(qū)域,以產(chǎn)生由在較長的波長的二次發(fā)射的熒光所產(chǎn)生的圖像。 現(xiàn)代熒光顯微鏡配備有反射光照明,納入中性密度濾光片和干涉濾光片一個專門的組合來從所檢測到的熒光發(fā)射偏析入射照明光。
熒光和相襯顯微鏡組合 -傳統(tǒng)相襯光學(xué)上可配上熒光顯微鏡觀察熒光的空間分布在客廳和固定細(xì)胞和地圖的發(fā)射強度,以特定的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。 因為相位對比技術(shù)需要被修改的環(huán)狀孔( 聚光鏡環(huán)形帶 ),并與空間濾波器( 相板 )定位在目標(biāo)后側(cè)焦平面檢測透射光照明,viewfields必須被獨立地選自熒光,以捕獲獲得*佳的對比度。 然后將得到的圖像進行組合(疊加)在空間上映射的熒光強度,蜂窩體系結(jié)構(gòu)的功能。 一些制造商提供低密度相位板,使活細(xì)胞的相襯和熒光的同時成像。
弗蘭克-康登原理 -執(zhí)政的熒光現(xiàn)象,它是基于一個事實,即在電子躍遷(由垂直線的弗蘭克-康登或Jablonski簡圖表示)的分子核是靜止的一個基本概念。 電子躍遷從基態(tài)到較高能級激發(fā)態(tài)發(fā)生在這么短的時間內(nèi)(以毫微微秒為單位)的核沒有足夠的時間來產(chǎn)生振動。 作為結(jié)果,只有電子躍遷從基態(tài)到可能發(fā)生的興奮是那些其中在基態(tài)和激發(fā)態(tài)的電子位置的概率*大重疊。
完整的半值寬度(FWHM) -發(fā)射波長的由玻璃或干涉濾光器的帶通區(qū)域由半*大值(簡稱FWHM)稱為全寬的參數(shù)描述。切口上,并切斷邊界被定義為下部和上部的波長通過的濾波器產(chǎn)生*大透射率的50%,并且中心波長(CWL)是在帶通區(qū)域的波長的算術(shù)平均值。 例如在40的FWHM表示發(fā)送帶寬跨越40納米,并且可以在紫外線,可見光或紅外線區(qū)域的任意位置具有一個CWL。 的半峰全寬也存在于許多課本稱為半帶寬(HBW)。
綠色熒光蛋白(GFP) -來自水母Aequorea victoria的 ,也就是通常用來確定在活細(xì)胞和組織的位置,濃度,相互作用和靶蛋白的動態(tài)衍生的天然存在的蛋白質(zhì)熒光探針。 增強型綠色熒光蛋白(一種遺傳衍生物)的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜具有*大值在489納米和508納米,分別。 在為了將綠色熒光蛋白(或任何其遺傳衍生物)導(dǎo)入細(xì)胞,該基因的DNA序列被連接到編碼目的蛋白質(zhì)的DNA。 經(jīng)過培養(yǎng)的細(xì)胞已轉(zhuǎn)染了修飾的DNA,它們能夠表達(dá)嵌合熒光蛋白的觀察用顯微鏡。
固有生命 -定義為激發(fā)態(tài)在沒有了競爭激發(fā)態(tài)電子的任何失活過程的生命周期中,內(nèi)在的壽命是衡量的速率常數(shù)熒光衰變的倒數(shù)。 在實踐中,熒光團的測定壽命的固有熒光壽命和非熒光過程(淬火,非輻射松弛,等等)導(dǎo)致的激發(fā)態(tài)弛豫的組合。測得的壽命總是小于固有壽命,是量子產(chǎn)率的一個指標(biāo)。
等吸光點 -當(dāng)熒光染料的經(jīng)歷在平衡的化學(xué)或物理反應(yīng)的激發(fā)或發(fā)射光譜被記錄為每個種類的濃度的函數(shù)的等吸光點通常被觀察到。 發(fā)射與波長(或頻率)這樣的混合物的曲線往往會相交于一個或多個點(波長),稱為等吸收點。 的效果,也可能出現(xiàn)在光譜中的一組的兩個或更多個不相關(guān)的,具有相同的總濃度無相互作用的熒光染料。 在一個單一的化學(xué)物質(zhì),在等吸收點將會出現(xiàn)在其中的摩爾消光系數(shù)是相等的所有波長。 作為一個例子,熒光染料Fura-2的激發(fā)光譜顯示一個等吸收點在362納米時的稀溶液進行滴定,用鈣。
雅布隆斯基圖 -由基態(tài)和激發(fā)態(tài)電子在熒光分子占據(jù)能級的圖形化描述。 單線態(tài)和三線態(tài)激發(fā)態(tài)通常是單獨示出,但彼此相鄰。 該Jablonski簡圖識別電子態(tài)和振動能級的相對能量位置為一系列的水平線。國家之間的電子躍遷是由直線的垂直線(激發(fā)和發(fā)射)表示,而內(nèi)部轉(zhuǎn)換,振動弛豫,淬火現(xiàn)象是由波浪垂直線表示。單重態(tài)和三重態(tài)之間的系間竄越被斜直線或波浪線所示。
液晶可調(diào)諧濾波器(LCTF) -一個電子控制裝置,使光成像質(zhì)量的過濾,同時提供一個清晰的光圈光學(xué)顯微鏡。這些過濾器通過一系列所構(gòu)成的雙折射材料層成對的液晶層和兩個線性偏振片之間夾著波片的操作。液晶層的雙折射是微調(diào),通過改變施加到相鄰的層的透明導(dǎo)電涂層上的電壓。進入過濾偏振光的波片,其被衰減,并轉(zhuǎn)換成幅值變化由分析器(第二偏振片)經(jīng)歷了一個波長相關(guān)的旋轉(zhuǎn)。LCTFs旨在通過改變液晶的雙折射性質(zhì)和采用多個波片串聯(lián)來控制濾波參數(shù)。
長通(LP)濾波器 -即衰減較短的波長和發(fā)送的光學(xué)干涉或有色玻璃過濾器(合格)在目標(biāo)光譜(紫外線,可見光或紅外線)的活性范圍更長的波長。長波通濾波器,其可以具有非常尖銳的斜率(以下稱為邊緣過濾器),是由截止波長在峰值傳輸?shù)?0%說明。在熒光顯微鏡下,長通濾波器是經(jīng)常使用的二色鏡和屏障(排放)濾波器。使用舊術(shù)語的高通來形容長通濾波器現(xiàn)已氣餒,因為它更準(zhǔn)確地指的是頻率,而不是波長。
發(fā)光 -光從發(fā)生從電子激發(fā)態(tài)產(chǎn)生的或者由一個物理的(光吸收)的任何物質(zhì)(通常是一個分子或原子)的排放,機械或化學(xué)的機理。發(fā)光正式分為兩大類,熒光和磷光,這取決于該激發(fā)態(tài)和發(fā)射通路中的電子配置。發(fā)光的產(chǎn)生可通過紫外光或可見光光子(發(fā)生過激勵的光致發(fā)光),一個電子束(陰極射線),施加熱(熱釋),化學(xué)能(化學(xué)發(fā)光),生物化學(xué)酶驅(qū)動的反應(yīng)(生物發(fā)光),或通過能量從一個機械作用(摩擦發(fā)光),如摩擦。
微通道板 -一盤,包括毛細(xì)管的壓縮數(shù)組,用金屬墻,這是專為第二代放大光電子信號(及更高代)圖像增強器。從增強靶光電子被加速到板,并進行多次碰撞和電子的擴增事件與所述管壁,從而產(chǎn)生一個大的電子級聯(lián)和原始光子信號的放大。微通道板是在熒光顯微鏡檢測到非常微弱的發(fā)射信號非常有用。
全內(nèi)反射熒光顯微鏡(TIRFM) -一個旨在探測熒光標(biāo)記活細(xì)胞的表面與光束不同折射率的兩種介質(zhì)之間旅行所產(chǎn)生的倏逝波技術(shù)。在實踐中,入射激光束被以臨界角(全內(nèi)反射)反射時,遇到一個顯微鏡載玻片和含有細(xì)胞的水性介質(zhì)之間的界面時。內(nèi)表面的幾個納米的熒光團是由倏逝波激發(fā),而距離越遠(yuǎn)則不受影響。該技術(shù)通常被用來研究分子的相互作用表面的地區(qū),這個地區(qū)是具有根本的重要性,以廣泛的細(xì)胞和分子生物學(xué)學(xué)科的頻譜。
發(fā)送的波前畸變(TWD) -失真引入到一個平面波陣面時,通過光學(xué)元件透射的程度。傳輸波前畸變是衡量一個波長(通常為550或630納米)的分?jǐn)?shù)或倍數(shù)。所發(fā)射的波陣面的畸變因表面平坦性的變化沿所述光學(xué)元件的外表面,以及從內(nèi)部不連續(xù)性和折射率的不均勻性。
三重態(tài) -對于任何多電子系統(tǒng)(在原子和分子),當(dāng)電子自旋是不成對的電子結(jié)構(gòu)被稱為三重態(tài)。另外,對于其他的量子數(shù)的值相等,更高多重的狀態(tài)是低能量的狀態(tài)。因此,激發(fā)三重態(tài)能量具有比相應(yīng)的單重態(tài)下。自旋量子數(shù)(S的原子或分子)是該系統(tǒng)中的電子自旋的總和的*值。這樣一個系統(tǒng)的多重性被定義為量2S +1,并與平行(未配對)旋轉(zhuǎn)的三重態(tài)的雙電子系統(tǒng),自旋量子數(shù)為1和多重性為3。
兩個光子(多光子)顯微 -激光掃描共聚焦顯微鏡,其中熒光染料的激發(fā)是基于紅外或長波長可見光激光束,其能量密度的衍生物技術(shù)被調(diào)整為允許倍頻或在光束聚焦點在試樣三倍。在試樣中的熒光團由兩個或三個光子同時激發(fā)而產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)轉(zhuǎn)換的相當(dāng)于單光子熒光。例如,二,三光子激發(fā),在900毫微米相當(dāng)于勵磁由450分別高能量光子和300納米。多光子顯微鏡能夠深深滲透到厚的組織和省去了一個針孔孔徑因為熒光發(fā)射被限制在一個單一的焦平面上。
體繪制 -用算法來創(chuàng)建三維圖像從任意角度的計算機可視化,無需任何中間設(shè)置為代表的表面幾何數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換的技術(shù)。在激光掃描共聚焦顯微鏡,體繪制通常是從熒光標(biāo)本采集制作在三維空間中樣本的半現(xiàn)實的模型光學(xué)部分棧進行。
楔(平行度) -在弧分或從平行平板光學(xué)元件(通常是一個過濾器或窗口)的外表面之間的變化的弧秒的測量。顯著楔角可以引入一個角偏差對波前穿過元件,從而導(dǎo)致圖像的變化和準(zhǔn)誤差時,光纖位于所述成像路徑。對于一個典型的過濾器元件或窗口,角度偏差的程度是大約二分之一的楔角。在內(nèi)部鍍膜的表面楔工件可以產(chǎn)生重影圖像作為離軸內(nèi)反射的結(jié)果。
縮放 -在激光掃描共聚焦顯微鏡,將變焦倍率控制允許在不同掃描在試樣上的光柵面積相當(dāng)程度的靈活性,因此提供了在橫向像素大小的連續(xù)控制(x - Y)試件平面。變焦控制有助于通過使顯微鏡的操作一致性,每股*小可分辨光學(xué)成像點兩個以上像素的奈奎斯特/香農(nóng)采樣標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化的圖像信息內(nèi)容。變焦控制通過調(diào)節(jié)檢流計的電流水平調(diào)節(jié)掃描鏡偏轉(zhuǎn)的程度