相差光學(xué)元件可以被添加到任意明視野顯微鏡，提供專門的階段物鏡符合管長度參數(shù)，和聚光鏡將接受正確的尺寸的環(huán)形相環(huán)。各大廠商都提供了他們的研究和教學(xué)水平的顯微鏡，在直立和倒置（組織培養(yǎng)）配置相差配件。

典型相差的組件可用于直立尼康顯微鏡從Eclipse系列研究都說明在圖1中，雖然類似的配件也由其他廠商生產(chǎn)。圖1中的聚光鏡是一種通用的系統(tǒng)設(shè)計(jì)的應(yīng)用利用了廣泛的放大倍數(shù)（2倍和100倍之間），配件數(shù)對(duì)比增強(qiáng)技術(shù)，包括微分干涉相差（DIC），暗場(chǎng)和相差。包含內(nèi)部相差板的物鏡是提供與各種光學(xué)矯正因素，范圍從簡單的消色差透鏡和平場(chǎng)復(fù)消色差的。此外，相差環(huán)板有幾個(gè)層次環(huán)繞眼波衰減產(chǎn)生不同程度的對(duì)比度和背景強(qiáng)度。正面和負(fù)面的階段物鏡也產(chǎn)生了眾多的廠家。

以便使聚光鏡的環(huán)形帶與物鏡的后焦平面，相差望遠(yuǎn)鏡（圖1中所示），可以采用插入一體的顯微鏡目鏡觀察筒的相差板。一個(gè)完整的階段附件套件范圍的成本從幾百到幾千元不等，這取決于物鏡的修正系數(shù)，復(fù)雜性和臺(tái)下聚光光學(xué)校正，以及是否相差望遠(yuǎn)鏡。以下各節(jié)更詳細(xì)地描述了這些組件，并提出了指導(dǎo)相差顯微鏡的配置和調(diào)整。

聚光鏡纖維環(huán)設(shè)計(jì)

相差輪（多個(gè)年輪環(huán)環(huán)，是拉丁詞）臺(tái)下聚光利用一個(gè)堂堂正正的顯微鏡，或聚光鏡內(nèi)的炮塔倒置顯微鏡的照明支柱，必須具體到一個(gè)特定的匹配配備一個(gè)相應(yīng)的相差板的物鏡。例如，將需要20倍的物鏡和100x物鏡，它們都包含附近的衍射面（后側(cè)焦點(diǎn)面）的相差板，聚光鏡的環(huán)形通道內(nèi)具有不同的直徑，對(duì)應(yīng)的物鏡放大倍率和數(shù)值孔徑。匹配的聚光鏡環(huán)物鏡相差環(huán)板，顯微鏡可以對(duì)齊疊加的物鏡階段環(huán)環(huán)上通過實(shí)現(xiàn)相差照明的照明光。

相差顯微鏡流行的萬能聚光鏡系統(tǒng)的設(shè)計(jì)的大部分都配有3個(gè)或多個(gè)可移動(dòng)的環(huán)形隔膜，這是可用于與4倍，10倍，20倍，40倍，60倍，100倍的物鏡含有適當(dāng)?shù)?/span>相差板。PH1（或同等學(xué)歷）聚光鏡環(huán)，其中包含最小光圈，設(shè)計(jì)要采用低暗場(chǎng)功耗的10倍和20倍的物鏡。中間倍率物鏡（40X和60X）利用PH2環(huán)，而最高權(quán)力（和數(shù)值孔徑）100倍的物鏡要求的PH3環(huán)的，其中包含的最大光圈。一個(gè)專門的聚光鏡的環(huán)形帶（PHL）是利用與低暗場(chǎng)倍率的物鏡（4倍和5倍）時(shí)從光學(xué)路徑或設(shè)計(jì)為倒置的組織培養(yǎng)顯微鏡的長工作距離聚光鏡除去聚光鏡擺動(dòng)透鏡。

聚光鏡的環(huán)形帶刀片具有一個(gè)沖壓環(huán)的中心具有不同的尺寸（圖1和圖2中示出）的圓形鋁板。沖壓操作后，環(huán)形盤單位陽極氧化處理及染色，用一臺(tái)黑色的色素吸收雜散光，確保照明光線穿過纖維環(huán)按照定義的途徑。被定位在板的中心的中心光停止，而異的大小取決于物鏡物鏡光圈和放大倍率范圍，由三個(gè)細(xì)長的選項(xiàng)卡，以120度的間隔隔開固定。環(huán)形板被按下，或者粘到圓形框架（也可陽極氧化處理和染成黑色的），它被裝配成圓形的開口部中的聚光器轉(zhuǎn)盤。

現(xiàn)代萬能聚光鏡系統(tǒng)的炮塔（見圖2）通常包含五至八個(gè)開放的插槽位置，可以配備環(huán)形相差板，DIC諾馬斯基的（沃拉斯頓）棱鏡板，或暗場(chǎng)光站牌。這些板的基本結(jié)構(gòu)是相似的。暗視野照明停止制造的類似的方式逐步環(huán)形隔膜，但該環(huán)形帶一般是寬，并具有較大的直徑，以使高度斜射光的波前通過。與此相反，DIC棱鏡切成粘到陽極化的幀，插入到轉(zhuǎn)塔的圓形板。

相差聚光鏡的環(huán)形隔膜板被插入到適當(dāng)?shù)奈恢迷谂谒蛷椈蓨A固定到位，炮塔開口的外圍內(nèi)的游樂設(shè)施。從彈簧夾的張力迫使環(huán)形帶的調(diào)節(jié)螺釘（螺紋銷）為中心的環(huán)形空間中的光學(xué)路徑（圖3中所示）使用的一組板對(duì)。一些制造商提供聚光鏡系統(tǒng)專為相差，具有不可分割的環(huán)中心系統(tǒng)。這些聚光鏡通常有一組可以通過按壓每個(gè)旋鈕的軸的致動(dòng)，直到其鎖定到一個(gè)環(huán)形帶調(diào)節(jié)螺釘?shù)恼{(diào)節(jié)旋鈕。后螺釘嚙合時(shí)，扭動(dòng)旋鈕使操作者相對(duì)于的物鏡相差板的中心聚光鏡的環(huán)形帶。

每當(dāng)一個(gè)普遍的顯微鏡聚光鏡用于相差觀察，操作人員應(yīng)是若干研究的孔徑光闌調(diào)節(jié)桿的位置，以確保膜片的開度較大比聚光纖維環(huán)的直徑。事實(shí)上，這是一個(gè)好主意，要始終打開隔膜相差期間觀測(cè)到最寬位置。一些制造商提供專為相差的聚光鏡，其中有一個(gè)彈簧加載的機(jī)制時(shí)自動(dòng)打開聚光鏡孔徑光闌相環(huán)旋轉(zhuǎn)到光學(xué)通路，但禁用此功能相同聚光鏡明場(chǎng)觀察。相差實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，可以返回顯微鏡明視場(chǎng)模式下，根據(jù)本發(fā)明的物鏡的數(shù)值孔徑調(diào)節(jié)聚光鏡可變光闌開口。

可在很寬的頻譜范圍從基本的阿貝設(shè)計(jì)（無色差和球面像差校正）高度糾正齊明消色差系統(tǒng)，配備了性能優(yōu)良的光學(xué)校正水平，相差聚光鏡。此外，專門的相差聚光鏡可具有較長的工作距離（LWD）的光學(xué)元件，為直立和倒置顯微鏡，以允許成像厚血管中的試樣。許多研究級(jí)倒置顯微鏡組織培養(yǎng)具有超長工作距離（ELWD）聚光鏡相年輪非常大的容器中，使觀察活細(xì)胞。

相差配件的規(guī)格可以從一個(gè)制造商的另一個(gè)顯著變化，也沒有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)相環(huán)形隔膜（和物鏡相差環(huán)板）為數(shù)值孔徑或放大尺寸。其結(jié)果是，從一個(gè)顯微鏡制造商的相差物鏡不能通常被耦合到從另一個(gè)（反之亦然）的相差聚光鏡。

單環(huán)相聚光鏡是非常普遍的，在同一時(shí)間，但已在很大程度上取代了萬能回轉(zhuǎn)頭模型。老聚光鏡需要?jiǎng)h除和插入不同階段年輪為物鏡改變時(shí)，繁瑣和費(fèi)時(shí)的任務(wù)，往往必須重復(fù)檢查細(xì)標(biāo)本細(xì)節(jié)時(shí)經(jīng)常在幾個(gè)倍率。中心定位在一個(gè)單一的環(huán)形帶聚光鏡的環(huán)形光闌類似的方式完成的，新的，普遍聚光鏡。對(duì)葉或螺旋彈簧單元聚光鏡內(nèi)的住房，無論是平刃或艾倫型的螺紋銷或螺絲是用來按環(huán)板。

為了適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的阿貝，消色力，或齊明臺(tái)下聚光相差觀測(cè)，必須建立一種機(jī)制，放置或非?？拷?/span>聚光鏡前焦距（光圈）面的環(huán)形隔膜。幾種聚光鏡模型制作的孔徑可變光闌（總是位于焦平面）定位在所述聚光鏡的基礎(chǔ)上，相鄰的槽設(shè)計(jì)為能接受的相差差板或暗視野照明停止。其他的聚光鏡設(shè)在殼體的中央?yún)^(qū)域，這是相對(duì)不可訪問的輔助元件，例如作為相差環(huán)形帶的開口面。

相差物鏡

相差顯微鏡的設(shè)計(jì)物鏡的最重要的屬性是一個(gè)專門的相差板位于或非常接近的衍射或后側(cè)焦點(diǎn)面的存在下。物鏡之間是不可互換的相差差板，并經(jīng)常永久蝕刻成的內(nèi)部透鏡元件之一。蝕刻環(huán)上涂有金屬膜的局部吸收，降低暗場(chǎng)了光透射，并且通常是由，使得相差光通過一個(gè)四分之一波長的相對(duì)于光透過玻璃的其余部分將向前。

圖4中所示的一個(gè)典型的相差物鏡甲切去圖。插圖示出的相差板，被定位在后側(cè)焦點(diǎn)面上。其他部分的物鏡是相同的，包括內(nèi)部鏡頭元件，建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)的明視場(chǎng)顯微鏡物鏡。校正因素，包括平場(chǎng)消色差，平場(chǎng)消色差，熒光，復(fù)消色差相差物鏡的范圍可以從各大廠商幾乎涵蓋了完整的域。這些物鏡也可與蓋玻片校正套環(huán)（干燥的高數(shù)值孔徑物鏡）和用于浸漬技術(shù)在水，甘油，油。此外，相差物鏡生產(chǎn)的，在不同的中性密度和相差差值的相差差板，在正面和負(fù)面的相差模式以產(chǎn)生一個(gè)廣泛的對(duì)比度水平。

尼康和其他制造商生產(chǎn)的各種相差物鏡（見圖5），不同的符號(hào)（正或負(fù)），范圍從相對(duì)較低暗場(chǎng)的對(duì)比度非常高。正相差，最常見的形式，出現(xiàn)暗光密的部分薄試樣的背景下，具有更輕的灰色陰影。負(fù)相差標(biāo)本呈現(xiàn)明亮，但疊加在一個(gè)黑暗的背景，類似暗場(chǎng)照明。

如圖5所示的數(shù)字圖像記錄，可使用目前的尼康的相差物鏡證明，得到的對(duì)比度變化，，由相差板中性密度變化和環(huán)繞的波前相差差（或提高）水平的比較。圖像從一個(gè)固定和安裝準(zhǔn)備的Zygnema絲狀藻類是相同的視場(chǎng)。圖5（a），圖5（b）和5（三）比較暗低暗場(chǎng)，低暗場(chǎng)，變跡暗相差物鏡（DLL，DL，ADL，），產(chǎn)生類似程度相對(duì)較輕對(duì)比灰色的背景。黑暗和光明的介質(zhì)尼康相差物鏡（圖5（d）和5（E））表現(xiàn)出積極和消極的一個(gè)中型的灰色背景相差。個(gè)別尼康相差物鏡的性質(zhì)在下面討論。

相差物鏡由各種類型的標(biāo)本的對(duì)比得到的程度是復(fù)雜的事實(shí)，大的波動(dòng)的折射率和厚度可以制作試樣區(qū)域內(nèi)的對(duì)比度反轉(zhuǎn)和顯著的光散射相差的焦平面。應(yīng)用于移的相差板（環(huán)繞的光的波前衰減）和相差特性（延遲或提前環(huán)繞的波陣面）的相差板在相差顯微鏡觀察的結(jié)果有很大的影響的吸收材料的密度。下面列出了幾個(gè)重要的特點(diǎn)，Nikon制造的各種階段的對(duì)比度物鏡。

DL（低暗-中等對(duì)比度） - DL物鏡產(chǎn)生較暗的圖像輪廓淺灰色的背景，是典型的用于各種用途相差觀察的物鏡。這些物鏡是提供最強(qiáng)在具有主要從周圍介質(zhì)的折射率差的試樣的暗的對(duì)比度。DL相差物鏡檢查細(xì)胞和其他半透明的生活材料，是最流行的款式，尤其適合于顯微攝影和數(shù)字成像。

DLL（低低暗-低對(duì)比度） -類似設(shè)計(jì)DL物鏡的，該DLL系列明照明產(chǎn)生更好的圖像，往往是作為一個(gè)“通用”的物鏡，在顯微鏡系統(tǒng)，利用多種照明模式，如熒光，DIC ，明場(chǎng)，暗場(chǎng)?！?/span>DLL相差物鏡產(chǎn)生對(duì)比度較低暗場(chǎng)比DL物鏡，但擁有更高的光傳輸值，光學(xué)矯正，比標(biāo)準(zhǔn)DL對(duì)應(yīng)的數(shù)值孔徑的。大部分由制造商提供的DLL相差物鏡有螢石或復(fù)消色差的像差校正水平。

ADL（變跡的低暗色-中等對(duì)比度） -尼康最近推出的變跡相差ADL物鏡包含了二次中性密度環(huán)環(huán)相差環(huán)板中央的兩邊。此外次級(jí)環(huán)有助于減少不必要的“鹵素”常與成像的大顆粒或在相差顯微鏡的試樣的功能（如細(xì)胞核，整個(gè)細(xì)胞和纖維）的影響。變跡的物鏡是在平場(chǎng)消色差透鏡光學(xué)校正和功能類似的到DL物鏡系列的對(duì)比度水平。

DM（中暗-高對(duì)比度） - DM物鏡產(chǎn)生一個(gè)中型的灰色背景上的暗圖像輪廓。這些物鏡被設(shè)計(jì)成用于有標(biāo)本的具有小的相移或細(xì)纖維，鞭毛，纖毛，顆粒劑，和非常小的顆粒的折射率的差異，如高的圖像的對(duì)比度。通常僅限于高倍率物鏡具有大數(shù)值孔徑（螢石和復(fù)消色差的），DM相差物鏡執(zhí)行非常薄的樣品，但厚標(biāo)本成像時(shí)，經(jīng)常表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)的對(duì)比。

BM（中亮-高負(fù)對(duì)比度） -通常被稱為負(fù)相差，BM物鏡一個(gè)中型的灰色背景上產(chǎn)生明亮的圖像輪廓。BM的物鏡是理想的細(xì)菌鞭毛，纖維蛋白束，分球，以及血液細(xì)胞計(jì)數(shù)的目視檢查。

為了使顯微鏡技術(shù)能夠快速識(shí)別相差物鏡，許多制造商題重要的規(guī)范，例如倍率，數(shù)值孔徑，管長校正等，在綠色字母上的外筒。綠色的字母數(shù)字顏色代碼用于區(qū)分普通明場(chǎng)，偏光，DIC和熒光的物鏡，或者使用另一種顏色的代碼或標(biāo)準(zhǔn)的黑色字體相差物鏡。此外，相差物鏡有銘文桶指示的物鏡是專為相差匹配環(huán)指定。表1中所述的一些最常遇到的物鏡每桶版畫。相差的物鏡，也可以很容易地識(shí)別持有物鏡明亮的光線透過玻璃窺視觀察中央位置的黑暗階段環(huán)。

相差物鏡稱號(hào)

表1

圖6給出了一個(gè)典型的系列相差物鏡具有增加的數(shù)值孔徑和放大倍率。作為一般規(guī)則，當(dāng)物鏡的數(shù)值孔徑和放大倍率增加時(shí)，相差板的寬度和直徑都下降（和聚光鏡的環(huán)形帶的尺寸的增大）。此外，如圖6中所示剖切表示正和負(fù)的相差板的施工背后的基本概念。正相差板產(chǎn)生暗的對(duì)比度而包含部分吸收膜的設(shè)計(jì)，以減少環(huán)繞波陣面的振幅。此外，該板包含設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)向90度（延緩）的衍射光的相差相阻燃材料。負(fù)相差板還包含兩個(gè)相阻燃，部分吸收材料。然而，在這種情況下，兩種材料被放置于圓形的相差環(huán)，使未衍射環(huán)繞的波陣面成為受影響的唯一的物種，衰減和相差滯后90度。

對(duì)比度是調(diào)制的相差的物鏡通過不同的相差板的屬性，包括金屬膜（防反射涂層），相阻燃材料的折射率，和的相差板的厚度的吸收。大多數(shù)制造商提供的相差差板是通過真空蒸鍍法，在玻璃板上或直接到一個(gè)顯微鏡物鏡的透鏡內(nèi)表面的薄的介電和金屬膜。電介質(zhì)膜的作用是把光的相差，而金屬膜未衍射的光強(qiáng)度衰減。一些制造商利用多個(gè)抗反射涂層與薄膜結(jié)合，以減少眩光量和光學(xué)系統(tǒng)的雜散光反射回。如果相差板的透鏡的表面上不形成，它通常位于附近的物鏡衍射平面的連續(xù)鏡頭之間的膠結(jié)。的厚度和折射率的電介質(zhì)，金屬，和防反射膜以及水泥的光學(xué)，精心選擇的，產(chǎn)生所需的相移的相差之間的互補(bǔ)（衍射）和共軛的區(qū)域（環(huán)繞）板塊。在光學(xué)術(shù)語，改變環(huán)繞的光的相差相對(duì)于衍射光的相差板90度（或正或負(fù)）被稱為四分之一波長板，因?yàn)樗鼈兊?a title='光程差' target='_blank' class='seolabel'>光程差的影響。

相差望遠(yuǎn)鏡

如果聚光鏡的環(huán)形帶，位于臺(tái)下聚光的前焦面，沒有確切固定的相差對(duì)準(zhǔn)在物鏡板（即位于中央位置沿顯微鏡光軸），相差對(duì)比光學(xué)系統(tǒng)所提供的對(duì)比效果將極大地?fù)p害。為了確保正確的顯微鏡操作，并最大限度地相差效果，物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面應(yīng)與聚光鏡的環(huán)形帶在這里進(jìn)行檢查，以確保正確對(duì)準(zhǔn)顯微鏡。這個(gè)任務(wù)可以通過使用相差望遠(yuǎn)鏡，它可以插入到一個(gè)目鏡觀察管（代替一個(gè)正常的目鏡），或顯微鏡，雙目或三目鏡筒組件內(nèi)置到一個(gè)勃氏鏡。

相差望遠(yuǎn)鏡，通常也稱為作為輔助望遠(yuǎn)鏡或顯微鏡輔助，包括一個(gè)簡單的兩個(gè)或三個(gè)透鏡望遠(yuǎn)鏡（圖7中示出）布置成充當(dāng)一個(gè)微型光學(xué)系統(tǒng)之間的中間物鏡和目鏡的組合望遠(yuǎn)鏡和顯微鏡。相差望遠(yuǎn)鏡的焦距范圍從約150毫米到200毫米，使移動(dòng)設(shè)備以集中在物鏡上的后側(cè)焦點(diǎn)面，當(dāng)插入的顯微鏡目鏡觀察筒。物鏡的焦平面的放大圖，清楚地揭示了聚光鏡之間的環(huán)空和物鏡相環(huán)被合適地聚焦時(shí)的相差望遠(yuǎn)鏡的空間排列。在檢視固定的相差環(huán)在物鏡上，操作者就可以執(zhí)行到聚光鏡的環(huán)形帶的位置調(diào)整對(duì)準(zhǔn)兩個(gè)相差觀察（參見圖8）。

設(shè)計(jì)主要是為了在偏振光下觀察或微分干涉相差顯微鏡往往有伯特蘭透鏡目鏡觀察管單元或目鏡管和顯微鏡體之間插入一個(gè)中間管被納入。勃氏鏡是較為復(fù)雜的比簡單的相差望遠(yuǎn)鏡，和作為中繼透鏡，傳輸?shù)斤@微鏡中間圖像平面位于目鏡孔徑光闌的物鏡的焦平面的圖像。因此，物鏡的后焦平面（和相差板/聚光鏡的環(huán)形帶對(duì)應(yīng)）的勃氏鏡與顯微鏡光學(xué)路徑插入，可以通過顯微鏡目鏡觀察。在大多數(shù)顯微鏡配備有伯特蘭透鏡，透鏡的光學(xué)通路的流入和流出旋轉(zhuǎn)，通過目鏡管下方的一個(gè)小的指輪機(jī)構(gòu)。后來模型顯微鏡往往伯特蘭透鏡安裝在炮塔一起改變圖像的放大倍率的鏡頭。是用一個(gè)小旋鈕，伯特蘭透鏡的位置，以及0或其他一些放大倍率鏡頭標(biāo)記的乙或pH調(diào)整。

相差望遠(yuǎn)鏡和Bertrand鏡頭必須配備了一種機(jī)制，調(diào)整焦距，因?yàn)?/span>物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面的位置可以隨放大倍數(shù)（以及一些其他因素），并在于在不同的高度，在顯微鏡內(nèi)。對(duì)焦的典型相差望遠(yuǎn)鏡只需通過加捻眼管（參見圖7），直到物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面，重點(diǎn)突出。以類似的方式，的的大多數(shù)現(xiàn)代顯微鏡的透鏡特朗配備的聚焦指輪，在物鏡上的相差板，使操作員能夠集中伯特蘭透鏡目鏡組合。利用匹配的物鏡集（齊焦，具有相同的光學(xué)矯正及管長的）時(shí)，應(yīng)保持的后焦平面位置基本上是相同倍率發(fā)生變化，從而減少了必須重新調(diào)整相差望遠(yuǎn)鏡或勃氏鏡。

相差顯微鏡對(duì)準(zhǔn)

在試圖對(duì)準(zhǔn)顯微鏡相差觀察，仔細(xì)檢查儀器，以確保所有的物鏡包含相差板，并牢牢地固定在物鏡轉(zhuǎn)換器。物鏡也應(yīng)該在它們的排列順序排列的物鏡轉(zhuǎn)換器上，從低暗場(chǎng)到高的放大倍率，以盡量減少一個(gè)聚光鏡之間的環(huán)形空間和其他的切換頻率。通常情況下，10倍和20倍的物鏡，都有一個(gè)共同的聚光鏡環(huán)，40倍和60倍的物鏡。高度校正的物鏡，如浸油設(shè)計(jì)的復(fù)消色差，往往有相似的數(shù)值孔徑，并在更寬的范圍內(nèi)的放大倍數(shù)（40倍到100倍），利用相同的聚光鏡的環(huán)形帶。低暗場(chǎng)功耗相差對(duì)比（4倍和5倍），通常需要擺動(dòng)鏡頭聚光鏡和一個(gè)專門的聚光鏡環(huán)。

聚光鏡的環(huán)形板也應(yīng)被順序地排列，從較低暗場(chǎng)倍物鏡設(shè)計(jì)用于與環(huán)形出發(fā)設(shè)計(jì)了一個(gè)以最高的放大率。在一般情況下，在整個(gè)放大倍率范圍可覆蓋三個(gè)或四個(gè)獨(dú)立的環(huán)形通道內(nèi)。如果一個(gè)普遍的聚光鏡，最低暗場(chǎng)放大倍率的環(huán)形帶（例如，PHL或Ph1染色體）到明視野插槽的右側(cè)，相鄰的插槽中的其他板按順序定位。通常情況下，試樣必須在明檢查之前或之后相差觀察，所以這個(gè)安排將提供一個(gè)容易的工作流程。

如圖8所示的物鏡的未對(duì)準(zhǔn)（圖8（a）和圖8（c））的后側(cè)焦點(diǎn)面的圖片，和聚光鏡的環(huán)形帶和相差環(huán)后已被正確地對(duì)準(zhǔn)（圖8（e））。在該圖中還示出了通過目鏡觀察（圖8（b），圖8（d）和8（f）條），這表明顯微鏡試樣時(shí)出現(xiàn)錯(cuò)位（圖8中觀察時(shí)，出現(xiàn)在相應(yīng)的圖像（ b）和圖8（d）），并小心地對(duì)準(zhǔn)（圖8（f）條）按程序概述如下。

建議采取以下步驟相差顯微鏡對(duì)準(zhǔn)。

在舞臺(tái)上放置明亮的染色標(biāo)本和旋轉(zhuǎn)10X相差物鏡的光學(xué)通路在明照明模式。聚焦樣本，并關(guān)閉視場(chǎng)光闌，直到它進(jìn)入視場(chǎng)邊緣。使用聚光鏡高度調(diào)節(jié)旋鈕，倉臺(tái)下聚光，所以個(gè)人的視場(chǎng)光闌葉片處于銳聚焦內(nèi)，使用主聚光鏡中心調(diào)整旋鈕，以確保視場(chǎng)光闌，在視場(chǎng)的中心。仔細(xì)檢討顯微鏡配置，以確?？评照彰饕呀?jīng)實(shí)現(xiàn)，并且標(biāo)本是大家關(guān)注的焦點(diǎn)。

取出染色標(biāo)本和標(biāo)本在顯微鏡舞臺(tái)上放置一個(gè)階段。物鏡試樣的情況下，僅具有最小的光程差（和可能是困難的可視化），對(duì)準(zhǔn)顯微鏡相差模式中，已知會(huì)產(chǎn)生高對(duì)比度的標(biāo)本。聚光器轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)，直到被定位在相應(yīng)的環(huán)形帶的光學(xué)路徑（PH1或相當(dāng)于10倍的物鏡）。檢查以確保聚光鏡環(huán)顏色代碼或題字相匹配的物鏡。檢查聚光鏡光圈撥桿的位置，將它移動(dòng)到最廣泛的光圈位置（聚光鏡設(shè)計(jì)相差可以這樣做，自動(dòng)）。

如果在顯微鏡配備有勃氏鏡，使用指輪控制擺動(dòng)透鏡到位。另外，刪除一個(gè)顯微鏡目鏡插入一個(gè)階段望遠(yuǎn)鏡觀察筒。

雖然通過目鏡或相望遠(yuǎn)鏡窺視，調(diào)整伯特蘭透鏡的焦點(diǎn)或望遠(yuǎn)鏡焦點(diǎn)眼管，直到在物鏡上形成了鮮明的重點(diǎn)相差環(huán)板，明亮的圖像之間的重疊的聚光鏡環(huán)和深色中性密度材料的相差板是顯而易見的。在許多情況下，在顯微鏡將初始對(duì)準(zhǔn)和環(huán)形帶的圖像，因此無法準(zhǔn)確地疊加在相差板的中性密度材料（如在圖1中（a）和圖1（c）所示）。

找到聚光鏡環(huán)形定心銷（或螺釘），該環(huán)形帶的位置調(diào)整用螺絲刀或一對(duì)相應(yīng)的旋鈕，直到它是重合的物鏡相差板（圖1（五））。注意：不要試圖定心旋鈕（通常位于聚光鏡上的安裝支架連接到顯微鏡）與主聚光鏡的聚光鏡的環(huán)形帶的位置調(diào)整。這方面的努力將可能不會(huì)達(dá)到預(yù)期的聚光鏡環(huán)對(duì)齊，肯定會(huì)危及的科勒照明條件，先前應(yīng)該已經(jīng)成立。

當(dāng)聚光鏡的環(huán)形帶的中心，所述環(huán)的光通過聚光鏡將中性密度材料施加到的物鏡相差板，減少纖維環(huán)圖像的強(qiáng)度衰減。因此，如果中心不當(dāng)聚光鏡的環(huán)形帶，一個(gè)明亮的月牙邊緣將出現(xiàn)在的物鏡相差板（圖1（a）和圖1（c））的中性密度材料相鄰。如果圖像不符合環(huán)內(nèi)的暗圈相差環(huán)板，那么無論是聚光鏡物鏡不集中焦點(diǎn)（科勒照明是不成立的），或相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭透鏡）后焦平面。在某些情況下，即使當(dāng)相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭透鏡）和臺(tái)下聚光正確對(duì)焦，聚光鏡環(huán)圖像模糊和出現(xiàn)的焦點(diǎn)。這可能是由于從試樣的低暗場(chǎng)頻衍射。如果發(fā)生這種情況，從舞臺(tái)取出試樣，并進(jìn)行顯微鏡對(duì)準(zhǔn)。

如果聚光鏡的環(huán)形帶的圖像顯著不同的物鏡相差板的尺寸，檢查以查看是否錯(cuò)誤的環(huán)形帶板已安裝在所述聚光鏡（最可能的原因）。另一種可能性，如果高數(shù)值孔徑的油浸物鏡，聚光鏡前鏡頭元件的設(shè)計(jì)是浸漬。在這種情況下，它可能是困難的（或不可能）疊加到聚光鏡上的相差板的環(huán)形空間之間的聚光透鏡的顯微鏡載片上（和/或物鏡和蓋玻片之間的）沒有一滴油。

當(dāng)聚光鏡環(huán)和物鏡相差環(huán)板是在正確對(duì)齊，圖1（e）所示的圖像應(yīng)該出現(xiàn)在相望遠(yuǎn)鏡目鏡與伯特蘭透鏡到位。在這一點(diǎn)上，在顯微鏡相差照明試樣的觀察而正確的配置。

更換相望遠(yuǎn)鏡的目鏡，或旋轉(zhuǎn)伯特蘭透鏡的光學(xué)通路，檢查標(biāo)本。應(yīng)顯示的背景顏色的中性灰色（根據(jù)物鏡相差板的中性密度）與試樣中可見高對(duì)比度。

一旦相差顯微鏡已對(duì)齊，它一般會(huì)保持其中心定位有相當(dāng)數(shù)量的物鏡/年輪的變化，但應(yīng)定期檢查，以確保正確對(duì)齊。如果在顯微鏡開始偏離了對(duì)齊出現(xiàn)在目鏡（或在計(jì)算機(jī)顯示器上），圖像會(huì)出現(xiàn)越來越多像那些觀察明照明。

顯微鏡制造商提供了一個(gè)綠色的干涉或吸收濾波器與其輔助相差包，因?yàn)闉V波器會(huì)產(chǎn)生用于原始校準(zhǔn)的物鏡相差差板具有相同波長的單色光。其結(jié)果是，對(duì)比度提高，當(dāng)過濾器被插入到光學(xué)路徑（通常是在照明聚光透鏡和視場(chǎng)光闌）。的大多數(shù)商業(yè)的相差差板的物鏡是產(chǎn)生一個(gè)四分之一波長的相移在可見光光譜的綠色（550納米）的部分。從理論上說，如果利用白光，而不是單色光，干擾滅絕不會(huì)是完整的所有顏色，對(duì)比度將受到影響。這個(gè)限制就顯得尤為重要，如果消色差透鏡的物鏡，這是糾正色差，只能在綠色區(qū)域，用于相差觀察或記錄圖像。然而，隨著目前的高度校正的螢石和復(fù)消色差的物鏡，對(duì)比度的區(qū)別通常是可以忽略不計(jì)，因此，無關(guān)緊要的。

用相差照明成像成功的關(guān)鍵是正確地對(duì)準(zhǔn)的顯微鏡，并確保足夠薄的試樣在顯微鏡載片上的安裝介質(zhì)內(nèi)均勻地分布。經(jīng)常遭受非常厚的標(biāo)本圖像的對(duì)焦模糊和難以解釋的對(duì)比反轉(zhuǎn)工件，可以。如果在相當(dāng)長的一段時(shí)間內(nèi)利用顯微鏡，偶爾檢查物鏡的后側(cè)焦點(diǎn)面，在物鏡驗(yàn)證聚光鏡的環(huán)形帶的對(duì)應(yīng)的相差板。