微分干涉對比

一步一步的指導(dǎo)最優(yōu)DIC設(shè)置

現(xiàn)場檢查未染色的生物標(biāo)本，經(jīng)常遭受來自貧困的對比度，因此能見度不良的標(biāo)本。厚的標(biāo)本，如大腦切片，特別注意到以上的淺灰色，而不是單細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這些標(biāo)本染色可以幫助提高對比度，但一般染色細(xì)胞殺死他們，由于固定過程。在顯微鏡的歷史中，已經(jīng)開發(fā)了一些對比方法，以提高對比度不破壞細(xì)胞。所有這些對比方法都有自己的長處和自己的短處。

在20世紀(jì)50年代GEORGES諾馬斯基開發(fā)基于偏振光和干擾的對比方法。這種方法被命名為微分干涉對比或DIC短的。 DIC的顯著提高未染色的細(xì)胞和組織切片成像是上級和清晰度。然而，正確的科勒低照度是強(qiáng)制性DIC

微分干涉對比（DIC）的基礎(chǔ)上，一個(gè)倒置的Leica DMI6000 B顯微鏡

本教程將解釋中的光學(xué)元件的光路和DIC的操作模式的例子一個(gè)Leica DMI6000 B的徠卡DMI6000 B是倒置和機(jī)動(dòng)高端的透射光的對比方法可用于研究光鏡下和熒光顯微鏡。

有一種意見認(rèn)為徠卡DMI6000 B顯微鏡的光路

在現(xiàn)代顯微鏡幾乎所有光學(xué)元件背后都隱藏著盾牌等防護(hù)罩，不工作在完全黑暗的情況下，讓操作。要顯示光學(xué)元件圖形中刪除盾牌和保護(hù)元件，并為您的橫截面模型。

微分干涉相襯的光路中的視圖

與任何其他的透射光照明技術(shù)，光路DIC的鹵素?zé)襞轃舻姆孔?，并開始通過光學(xué)元件，我們將在下面的章節(jié)中詳細(xì)講解。然后，通過試樣的光菌株在舞臺上，在它到達(dá)最復(fù)雜的現(xiàn)代顯微鏡的物鏡的精密的光學(xué)部件的光學(xué)部件。的光可以被定向到一個(gè)攝像頭（左）或目鏡（右）或兩個(gè)裝置在同一時(shí)間。

微分干涉對比相關(guān)組件

除此之外，聚光鏡，孔徑光闌和物鏡的光學(xué)元件，例如，一些額外的組件被插入到光束路徑來實(shí)現(xiàn)DIC。光到達(dá)試樣之前，它首先必須通過通過一個(gè)偏振濾光器，并隨后通過一個(gè)的沃拉斯頓棱鏡（或利用Nomarski棱鏡，它是基于一個(gè)沃拉斯頓棱鏡上）。通過標(biāo)本和物鏡后，輕者會(huì)通過另一個(gè)的沃拉斯頓棱鏡和偏振濾鏡。請注意，第二偏振器也可以設(shè)在過濾器中的多維數(shù)據(jù)集，以允許完全自動(dòng)化的偏振器的光束路徑去除。

為了解釋這點(diǎn)的細(xì)節(jié)，參與DIC的光學(xué)組件的示意性表示示出從這里開始。

示意圖

此示意圖顯示了一個(gè)顯微鏡觀察的物鏡，并且不是所有的光學(xué)元件是在該圖中可見的所必需的主要部件。

示意圖

通過它的光通過第一沃拉斯頓棱鏡位于在聚光器轉(zhuǎn)盤。這具有的優(yōu)點(diǎn)是沒有必要的，如果是渥拉斯頓棱鏡可以很容易地從光束路徑中刪除。此外，在這種表示中，在聚光鏡中也位于聚光透鏡變?yōu)榭梢姟?/span>

現(xiàn)在你可以看到所有光學(xué)元件所需DIC。接下來的幻燈片本教程將帶你一步一步通過顯微鏡的光路那么DIC聘用。所有的光學(xué)元件和其上的光通過的影響進(jìn)行說明。

采用偏振光微分干涉對比

后視場光闌的光穿過第一光學(xué)元件是一個(gè)偏振濾光器。第一偏光過濾器位于聚光鏡炮塔上方，將在本教程的角度為0°極化光。在本教程中所有數(shù)值的角度選擇DIC的概念更容易理解的例子。然而，彼此之間的關(guān)系的角度總是正確的。

沃拉斯頓棱鏡創(chuàng)建兩個(gè)姐妹射線

當(dāng)0°偏振的光線通過渥拉斯頓棱鏡，它被分成一個(gè)姐妹對垂直于偏振光彼此的角度為90°。所產(chǎn)生的光線的偏振面，因此在本例中的45°和135°。這兩種射線是扎進(jìn)空間接近，并不能干涉，因?yàn)樗麄冇胁煌臉O化和稍微抵銷。

姐妹射線與標(biāo)本

聚光透鏡將光線聚焦在試樣上。根據(jù)試樣的屬性，可能會(huì)遇到的姐妹光線引起相移的現(xiàn)象。此外，光線不再是45°或135°極化會(huì)發(fā)生（象征通過更薄的紅線）。在這一點(diǎn)上，兩個(gè)相同的圖片，試樣。由于沃拉斯頓棱鏡的光，產(chǎn)生這些圖像已通過，一個(gè)圖像是由45°偏振光和135°偏振光。還設(shè)有一個(gè)輕微的xy這些圖像之間的偏移量為渥拉斯頓棱鏡產(chǎn)生兩個(gè)在空間上稍微分開的射線。正如上文所述，姐姐圖像中的光線的相位可能也有所不同。

物鏡將圖像放大

物鏡將收集的光放大圖像。隨后，光線會(huì)穿越另一個(gè)沃拉斯頓棱鏡。

第二沃拉斯頓棱鏡重組的姐妹射線產(chǎn)生干擾

在第二沃拉斯頓棱鏡，具有相反的功能的第一沃拉斯頓棱鏡：團(tuán)聚成一個(gè)聯(lián)合的射線與極化方向90°的45°和135°偏振姐姐射線?；叵胍幌拢饩€可能具有不同的相位，因?yàn)樗鼈冸m然略低的試樣在不同的位置通過。如果是這樣的話，光線的光的波會(huì)干擾，只要他們在空間上團(tuán)聚，并具有相同的偏振。因此，所產(chǎn)生的射線，將有一個(gè)結(jié)合的波形相比，減少或增加的幅度（即亮度）的光線進(jìn)入第二沃拉斯頓棱鏡。這種效應(yīng)相移轉(zhuǎn)換成幅移，這會(huì)導(dǎo)致在結(jié)構(gòu)中的標(biāo)本圖像變暗或變亮的光線經(jīng)歷的姐妹之一。其結(jié)果是大幅度提高檢體圖像中的對比度。

第二個(gè)偏振片過濾器雜散光

最后但并非最不重要的，光有通過所述第二偏振器，它被設(shè)置為90°的位置上，只允許有90°偏振的光通過，并保持在第二沃拉斯頓棱鏡中的雜散光不發(fā)生團(tuán)聚。因此，圖像幾乎完全是從已經(jīng)通過第一偏振器和兩個(gè)渥斯頓棱鏡的DIC的效果是無法相比的雜散光的光形成。

微分干涉相襯照明

通過光束路徑DIC在經(jīng)歷后，本教程將繼續(xù)解釋如何樹立正確的DIC照明。試樣在不同地區(qū)實(shí)測的代表圖像將顯示在右下方。

深色現(xiàn)在的位置

DIC照明之前，可以采用偏光過濾器必須設(shè)置在所謂的“暗倉”。這意味著，要設(shè)定在一個(gè)位置，沒有光通過偏振過濾器在一個(gè)90°的位置彼此的偏振過濾器。要設(shè)置暗的位置，光路中的所有元素，可能會(huì)改變光的偏振被刪除。因此，渥拉斯頓棱鏡和試樣光束路徑中取出。

設(shè)置暗的位置是一個(gè)重要的步驟，離開第二沃拉斯頓棱鏡的光90°極化和第二偏振濾波器是不可見的，如果沒有正確對齊，否則將被視為雜散光ONY。

黑暗中的位置

黑暗中的位置可以很容易地確定通過目鏡觀察或攝像機(jī)圖像的標(biāo)本。為了找黑暗的位置之一，偏光濾波器有一個(gè)完全黑暗的形象被扭曲，直到可以觀察。這是通過設(shè)置兩個(gè)偏振濾光器90°的偏振平面彼此。在倒置顯微鏡像徠卡DMI6000乙的情況下，聚光器轉(zhuǎn)盤過濾器，偏振是可動(dòng)的。

設(shè)置暗位置

試著尋找黑暗中的位置移動(dòng)偏光過濾器觀察攝像機(jī)圖像。

完整的光束路徑

現(xiàn)在，在黑暗的位置被設(shè)置，渥拉斯頓棱鏡和試樣重新引入到光束路徑和試樣DIC的圖像是可見的。

微分干涉對比圖像的修改

DIC的照明提供了可能性來修改圖像。姐姐光線彼此相對的相位可以被改變，這是通過橫向移動(dòng)的第二沃拉斯頓棱鏡。改變相位的光線相對于彼此的結(jié)果在第二沃拉斯頓棱鏡所產(chǎn)生的合成波形的振幅的變化。這可以給人一個(gè)印象清晰或平滑的對比。

微分干涉對比圖像的修改

看看會(huì)發(fā)生什么，如果沃拉斯頓棱鏡的位置被改變，通過移動(dòng)滑塊和觀察的攝像機(jī)圖像。

需要注意的是在一定的棱鏡位置的圖像逆結(jié)構(gòu)的三維印象確認(rèn)為山谷和丘陵成為反之亦然。

感謝您加入本教程！