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尼康顯微鏡:活細胞成像對光學系統(tǒng)和CCD的要求
在活細胞研究設計的光學顯微鏡系統(tǒng),主要考慮檢測器的靈敏度(信號與噪聲),圖像采集所需要的速度,以及標本的可行性。相對較高的光照強度和較長的曝光時間,通常采用固定的細胞和組織(如漂白是主要的考慮因素)中記錄圖像時,必須嚴格避免與活細胞。在幾乎所有的情況下,活細胞顯微代表了一種妥協(xié)之間實現(xiàn)最佳的圖像質量和保持健康的細胞。不必要的過采樣的時間點,使細胞含量超標的照明,空間分辨率和時間分辨率的實驗,而不是
2020-09-04
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奧林巴斯顯微鏡:熒光的基本概念
熒光是敏感,其中創(chuàng)建的物理(例如,光的吸收),機械(摩擦),或化學機制從電子激發(fā)態(tài)的分子發(fā)光的無處不在的發(fā)光過程家族的成員。通過由紫外線或可見光的光子的分子的激發(fā)發(fā)光發(fā)電的是這樣一種現(xiàn)象稱為光致發(fā)光,正式分為兩大類,熒光和磷光,這取決于激發(fā)態(tài)的電子組態(tài)和排放路徑。熒光是一些原子和分子的屬性,在一個特定的波長吸收光,并隨后經過短暫的時間間隔更長的波長的光發(fā)射被稱為熒光壽命。發(fā)生的方法的磷光熒光的方式
2020-09-04
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尼康顯微鏡:熒光激發(fā)塊的分類
落射熒光的干擾和吸收濾色鏡組合被安置在濾色鏡立方體(或光學塊),并包括激發(fā)濾光片,二色性分束器(通常稱為反光鏡),和光柵(或發(fā)射)的濾色鏡,如在圖1中示出(一)。使用本指南中選擇適當?shù)臑V色鏡設置為廣角熒光顯微鏡調查所用的發(fā)色團的激發(fā)和發(fā)射光譜特性相匹配。作為一個例子,圖1(b)給出一個典型的高性能帶通發(fā)射藍光激發(fā)濾色鏡組合的光譜。尼康熒光濾光器組合中所提供窄,中,寬的通帶激發(fā)版本與相應的發(fā)射濾色鏡
2020-09-04
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尼康顯微鏡:熒光顯微鏡的結構
由有機和無機樣品的光的吸收,隨后再輻射通常是既定的物理現(xiàn)象作為熒光或磷光的結果。通過光的發(fā)射熒光過程幾乎是同時地吸收的激發(fā)光的光子的吸收和發(fā)射,取值范圍通常小于一微秒的持續(xù)時間相對較短的時間之間的延遲。當發(fā)射仍然存在更長的時間后已經熄滅的激發(fā)光,該現(xiàn)象被稱為磷光。首先描述英國科學家喬治爵士G.斯托克斯于1852年,是負責這一術語時,他觀察到的礦物螢石發(fā)出紅光,當它被照亮的紫外線激發(fā)熒光。斯托克斯指
2020-09-04
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奧林巴斯顯微鏡:熒光激發(fā)和發(fā)射基本面概述
由于其新穎的電子配置,熒光染料有獨特的特征吸收光譜(通常是類似的激發(fā))和發(fā)射。這些吸收光譜和發(fā)射光譜表明相對強度的熒光,與經典的相對強度與波長在橫軸上繪制在垂直軸。對于一個給定的熒光染料,制造商指示的照明激發(fā)光強度和熒光的發(fā)光強度的峰值波長為峰值波長。重要的是要了解顯示對于一個給定的熒光染料的激發(fā)和發(fā)射光譜的圖表和曲線的原點。為了確定一個特定的熒光染料的最大吸收波長(通常是相同的激發(fā)最大值)的發(fā)射
2020-09-04
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尼康顯微鏡:熒光蛋白的成像參數(shù)
迄今發(fā)現(xiàn)的熒光蛋白及衍生工具的廣泛用途相當廣泛,并已成功地應用在幾乎每一個生物學科從微生物系統(tǒng)生理學。這些獨特的探頭已經證明是非常有用的記者在培養(yǎng)細胞和整個動物的基因表達研究。熒光蛋白在活細胞中,最常用的跟蹤本地化和動態(tài)的蛋白質,細胞器,和其他細胞區(qū)室,以及細胞內蛋白質運輸示蹤劑。很容易地完成了多種技術,其中包括寬視場,共聚焦和多光子顯微鏡,熒光蛋白的定量成像曝光細胞結構和功能的復雜性,提供了一個
2020-09-04
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尼康顯微鏡:熒光蛋白的成像參數(shù)
迄今發(fā)現(xiàn)的熒光蛋白及衍生工具的廣泛用途相當廣泛,并已成功地應用在幾乎每一個生物學科從微生物系統(tǒng)生理學。這些獨特的探頭已經證明是非常有用的記者在培養(yǎng)細胞和整個動物的基因表達研究。熒光蛋白在活細胞中,最常用的跟蹤本地化和動態(tài)的蛋白質,細胞器,和其他細胞區(qū)室,以及細胞內蛋白質運輸示蹤劑。很容易地完成了多種技術,其中包括尼康顯微鏡,寬視場,共聚焦和多光子顯微鏡,熒光蛋白的定量成像曝光細胞結構和功能的復雜性
2020-09-03
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奧林巴斯顯微鏡:光學熒光筆熒光蛋白
熒光蛋白的發(fā)現(xiàn)和后續(xù)優(yōu)化中的遺傳性質的這些顯著的探針來生成各種各樣的發(fā)射帶寬配置已擴展生物學家在活細胞中具有高時空分辨率的可視化,跟蹤和量化分子事件的能力。熒光蛋白可以融合到幾乎任何感興趣的蛋白質或酶,礁珊瑚,水母和??锓N的各種來自以分析在活細胞中蛋白質地理,運動,血統(tǒng),和生物化學。在此方面,這些生物探針提供了一個重要的新的方法來了解蛋白質的功能,這是一個合乎邏輯的步驟細胞過程的調查,現(xiàn)在許多生
2020-09-03